单宁含量测定(三种方法)研究报告.ppt

不同方法测定单宁（tannin）含量 的比较研究 测定单宁含量的方法 一、比色法 二、EDTA络合滴定法 三、高锰酸钾滴定法 三种方法的比较 方法一、 比色法 一、 实验目的 了解单宁的性质及熟练掌握单宁含量的测定方法 二、实验原理 样品中的单宁在碱性溶液中将磷钨钼酸还原，生成深蓝色化合物，其颜色的深浅与单宁的含量成正比，可与标准进行比较定量。 三、材料、仪器与试剂 1、材料： 香蕉（未熟透）50g 2、仪器： 天平 组织捣碎机 烧杯 移液管 分光光度计 容量瓶 恒温箱 （30℃） 3、试剂 ： ① 标准单宁酸溶液（0.5mg/mL）：准确称取标准单宁 酸50 mg，溶解后用水稀释至100 mL，用时现配。 ② F-D( Folin-Donis)试剂：称取钨酸钠（Na2WO4·H2O） 50g、磷钼酸10g，置于500mL锥形瓶中，加375mL水溶解， 再加磷酸25mL，连接冷凝管，在沸水浴上加热回流2h，冷却 后用水稀释至500mL。 ③ 60g/L 偏磷酸溶液。 ④ 1 mol/L碳酸钠溶液：称取无水碳酸钠53g，加水溶解并稀释至500mL。 ⑤ 95%和75%乙醇溶液。 四、实验步骤 1、标准曲线的绘制 按下表编号，分别加入试剂 于50mL容量瓶，加完后，剧 烈 振摇，以蒸馏水稀释至刻度，充分混合，于30℃恒温箱中放置 ， 1.5h后，用分光光度计在波长680处测定吸光值，并 绘制标准曲线。 四、结果计算 式中: x—样品中单宁的质量分数，%； c— 比色用样品溶液中单宁的含量（由标准曲线查得 ），μg； m — 样品质量，g； K —稀释倍数，如按上述方法取样50时，K=（20/200）×（2/100）=1/500 五、注意事项 1、样品处理时要尽快进行，以免单宁氧化而造成误差。 2、维生素C也能与F-D试剂作用产生蓝色，因此当样品含有维生素C时需要进行校正，1㎎维生素C相当于0.8㎎单宁酸。 方法二、EDTA络合滴定法 一、 实验目的 了解单宁的性质及熟练掌握单宁含量的测定方法 二、实验原理 根据单宁可与重金属离子形成络合物沉淀的性质，在样品提取液中加入过量的标准Zn(Ac)2溶液，待反应完全后，再用EDTA标准溶液滴定剩余的，根据EDTA标准溶液的消耗量，可计算出样品中单宁的含量。 三、材料、仪器与试剂 1、材料： 香蕉（未熟透）5g 2、仪器：容量瓶 电子天平 研钵 碱式滴定管 3、试剂： ①1.000 mol/L醋酸锌标准溶液：准确称取Zn(Ac)2·H2 O 21.95g,用水溶解后定容至100mL。 ②0.0500 mol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA）标准溶液：准确称取乙二胺四乙酸二钠9.306g,溶解于水，并用水稀释至500mL. ③pH=10的NH3-NH4Cl缓冲溶液：称取54gNH4Cl 加水溶解后加入浓氨水350mL,用水定容至1000mL。 ④铬黑T指示剂：称取0.59铬黑T，溶于10mL pH=10的NH3-NH4Cl缓冲溶液中，用95%乙醇定容至100mL。 四、实验步骤 1.样品处理 称取切碎混匀的样品5~10g，置于研钵中，加少许石英砂研磨成浆状（干样品经磨碎过筛后，准确称取1~2g），转入150mL锥形瓶中，用50mL水分多次洗净研钵，洗液一并转入锥形瓶中，振动、提取10~15min. 2.络合沉淀 在100mL容量瓶中，准确加入Zn（Ac）2标准溶液5mL、浓氨水3.5mL，摇匀（开始有白色沉淀产生，摇动使沉淀溶解）。慢慢将提取物转入容量瓶中，不断振摇，在35℃水浴中保温 ４．结果计算 方法三、高锰酸钾法 一、目的 了解单宁性质及熟练掌握单宁含量的测定方法 二、原理 作为多酚，单宁是一种强还原剂，极易被氧化剂氧化，还可被活性炭吸附。本测定以高锰酸钾为氧化剂，根据样品中单宁可以被活性炭吸附，测定样品液用活性碳吸附前后的氧化值之差，计算单宁物质的含量。 三、材料、仪器与试剂 1、材料：香蕉（未熟透） 2、仪器 ：天平 研钵 烧