DADS对DJ1核定位高表达人白血病HL60细胞生物学行为影响.pdfVIP

本研究基金资助项目 1、国家自然科学基金 2 、湖南省高校创新平台开放基金 11K057 万方数据 目 录 一. 中文摘要… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 1 二. 英文摘要… … … … … … … … … … … … … … … … … … … …4 三.正文 1 .前言… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 6 2 . 材料与方法… … … … … … … … … … … … … … … … … … … 8 3 . 实验结果… …… …… …… ……… …… …… ……… …… …1 5 4 . 讨论… …… …… …… …… ……… …… …… ……… …… …26 5 . 结论… …… …… …… …… ……… …… …… ……… …… …30 四. 参考文献……… …… …… ……… …… …… ……… …… …3 1 五. 附录…… ……… …… …… ……… …… …… ……… …… …37 六. 综述…… ……… …… …… ……… …… …… ……… …… …38 七.撰写论文……………………………………………………………46 八. 致谢…… ……… …… …… ……… …… …… ……… …… …47 万方数据 DADS 对DJ-1 核定位高表达人白血病HL-60 细胞 生物学行为的影响 硕士研究生：秦 晶 硕士生导师：谭 晖 副教授 中 文 摘 要 目的:研究二烯丙基二硫（DADS ）对DJ-1核定位高表达人白血病HL-60细胞生物 学行为的影响，阐明DJ-1在细胞核内的功能，为肿瘤在临床诊断及治疗过程中提 供一个潜在的治疗靶点或有效药物。 方法:通过lipo fectamine 2000 脂质体介导的基因转染技术，将携带有DJ-1 基因 细胞核定位表达质粒pCMV/myc/nuc-EGFP-DJ-1 转染至人白血病HL-60 细胞中， G418 筛选出稳定DJ-1 核内高表达HL-60 细胞系，用荧光显微镜观察绿色荧光信 号，Western blot 检测转染前后DJ-1 蛋白在细胞浆、核内表达情况。转染成功后 实验分三组：对照组（HL-60 细胞）、空载体组及高表达组（DJ-1 核定位高表达 HL-60 细胞），利用软琼脂集落形成实验、MTT 法、流式细胞术、间接免疫荧光 细胞化学实验、硝基蓝四氮唑（NBT ）还原比色实验、Giemsa 染色法、Transwell 迁移侵袭小室实验及Western blot 检测DADS 对HL-60 细胞增殖、周期、分化、 迁移侵袭能力及核内DJ-1 蛋白表达的影响。 结果: 1.成功建立稳定DJ-1 核内高表达的HL-60 细胞系。 测序结果证实，DJ-1 基因的细胞核定位表达质粒pCMV/myc/nuc-EGFP-DJ-1 的插入序列与DJ-1 全长cDNA 的GenBank 序列完全一致。荧光显微镜观察高表 达组细胞中可见绿色荧光信号。Western blot 检测高表达组细胞核内DJ-1 蛋白的 表达量明显增高，提示成功稳定的DJ-1 核内高表达HL-60 细胞株。 2.DADS