第八章胚胎移植总结.ppt

家畜繁殖学 第八章 胚胎移植 第八章 胚胎移植 一、概述 二、胚胎移植生理学基础和基本原则 三、同期发情和超数排卵的实施 四、胚胎采集 五、胚胎的检查与鉴定 六、胚胎的保存 七、胚胎的移植 一、概述 （一）含义 胚胎移植是指将一头优良种母畜配种后的早期胚胎取出，移植到另一头同种且生理状态相同的母畜体内，使之继续发育成为新个体的过程。 （二）技术程序 1.供体和受体的同期发情 2.供体母畜超数排卵 3.供体的发情鉴定和配种 4.胚胎的采集 5.胚胎的检查与鉴定 6.胚胎的保存 7.胚胎的移植 技术程序 1.充分发挥优良母畜的繁殖潜力。 2.缩短世代间隔，及早进行后裔测定。 3.提高生产效率。 4.代替种畜的引进。 5.保存品种资源。 二、胚胎移植的生理学基础和基本原则 （一）胚胎移植的生理学基础 每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育 早期胚胎处于游离状态 胚胎发育不存在免疫问题 胚胎和受体之间建立有效联系 胚胎的遗传特性不受受体的影响 （二） 胚胎移植的基本原则 1.胚胎移植前后所处的环境的同一性 (1)供体和受体在分类学上的相同属性 (2)动物生理上的一致性：受体和供体在发情时间上的同期性 (3)动物解剖位置上的一致性：空间环境的一致性 2.胚胎的发育期限：必须处于周期黄体期内 3.胚胎的质量：胚胎必须是正常的，并在处理过程中不受不良因素的影响 三、同期发情与超数排卵的实施 （一）供体和受体的选择 供体应具有相当高的育种价值，供体生殖机能应处于较高的状态，产后60天以上，无生殖系统疾病，体质强健 受体应容易购买，繁殖性能好，对地方适应性强，体型中上等，非优良品种。受体健康状况良好，已进入发情季节。 缩短黄体期 (前列腺素法PG法) 延长黄体期（孕酮法） 1.牛（1）FSH法：（减量注射法） 供体牛在发情后的9-13d肌注FSH，早晚各一次，分4d减量注射。在第3d时同时子宫灌注PGF2a 。 （2）PMSG法 孕马血清促性腺激素(PMSG)处理法 在发情期的11-13天，一次肌注PMSG2500～3000IU，48h后宫注PGF2α2.4mg。发情后约18h肌注等量的抗PMSG。 2.羊的超排处理 FSH+PG法：从供体发情周期的第9-13天开始注射FSH，以日递减剂量连续注射3天6次，每次间隔12小时,总剂量为150-300IU，在第5次注射FSH的同时肌注氯前列稀醇0.1毫克。 1.发情鉴定：外部观察法、试情法、阴道检查法、直肠检查法 超排处理后12-48h发情 2.配种 配种：自然交配、人工授精。 选择适当的时间，使用优良种公畜的精液对供体母畜进行输精。 为了得到较多的发育正常的胚胎，使用密度大、活率高的精液输精，并且将输精次数增加到2～3次，间隔8-10h。 五、胚胎的检查与鉴定 收集到的冲冼液，需静置10min，使胚胎下沉到容器底部，然后移去上清液，再放于解剖镜下检查胚胎的数量和发育情况，再将发育正常的胚胎收集到注射器或移植管内供移植用。 胚胎的检查项目： 1.受精卵整体的形态和体积大小； 2.透明带形状，厚度及损伤程度； 3.发育正常胚胎的卵裂球应该具有整齐的外形，大小一致，分布均匀而紧密，发育速度与胚龄一致； 4.卵细胞表面颗粒的状态和多少等。 A级;形态完整,轮廓清晰,呈球形,分裂球大小均匀,透明带适中； B级;轮廓清晰,色调和细胞密度良好； C级;轮廓不清楚,色调发暗,结构较松散,游离的细胞和液胞较多； D级;轮廓模糊,色调暗,结构松散,碎片细胞和液泡很多。 A、B级胚胎 胚胎的分级 六、胚胎的保存 1、常温保存：15～25℃ 2、低温保存：0～10℃ 3、冷冻保存：-79～-196 ℃ 1）逐步降温法 室温下胚胎置于小分子量可渗低温保护溶液中，且在胚胎和冷冻保护液之间达到平衡； 一般在-5℃～-7℃植冰； 可控的、缓慢降温（0.33～1.0℃／分）； 降温到-30℃或-70℃时，投入液氮中保存； 快速解冻； 在培养或移植前，在室温下除去低温保护剂，为保持细胞的正常生理功能。 3. 冷冻保存 七、胚胎的移植 1.手术法移植（各种家畜和实验动物） 在受体腹部作一切口，找到排卵一侧的卵巢并观察黄体发育情况，然后用注射器或移植管将含有胚胎的培养液或冲冼液注入到子宫角内或输卵管内。另外可采用腹腔内窥镜移植 2.非手术法移植（大家畜） （1）先将胚胎装入0.25ml的塑料细管内； （2）直肠检查黄体位置后，最好先作硬膜外腔麻醉，然后似人工授精般将胚胎用移植管通过子宫颈放入到与黄体同侧的子宫角的大弯或大弯深处内，或两侧子宫角各放一枚胚胎。 受体与产的羔羊 受体黄牛与胚胎移植生产的良种肉牛 小