不同时期终丝与生长因子对神经干细胞增殖及分化的影响.pdf

摘要 不同时期终丝和生长因子对神经干细胞增殖及分化 的影响 研究生： 卜建文 导师：刘福云 郑州大学第三附属医院小儿骨科 郑州450052 摘 要 引言 先天性脊髓病变是严重影响患儿中枢神经系统发育的一类疾病，这类疾病 包括脊髓拴系综合征(Tetheredcord cord syndrome，TCS)，脊髓纵裂(Split 尤其以脊髓拴系综合征(TCS)对患儿生长发育影响较大，TCS是由于终丝病变 弹性降低，对脊髓圆锥末端产生持续牵拉作用，导致脊髓局部缺血缺氧改变， 造成脊髓组织的神经元细胞线粒体氧化磷酸化功能障碍，导致神经纤维的传导 功能受损，逐渐出现双下肢感觉运动障碍，双足畸形，大小便功能障碍等一系 列神经损害临床表现的一种疾病。目前对于TCS主要治疗方式为病变终丝的切 除和对脊髓圆锥末端粘连组织的松解，以达到对脊髓圆锥末端的充分松解，使 其逐渐恢复到正常水平，进而终止或改善已出现的临床症状。但是目前这种治 分离出在体外可以不断分裂增殖更新，具有向神经元细胞、星形胶质细胞和少 stem 突胶质细胞方向分化的多潜能的细胞群，提出了神经干细胞(neural 性细胞，损伤后不可再生的观念，为中枢及外周神经系统疾病的治疗和功能恢 复带来了新的希望，同时也为神经系统疾病的治疗提供了一种新的治疗策略一 神经干细胞移植。以往对于脊髓中NSCs的研究认为其只存在于脊髓室管膜下， 终丝组织不存在NSCs，对终丝组织的认识只是将其看作是从脊髓末端向下延续 摘要 穿出硬脊膜连接尾骨的一结构简单的纤维血管复合物，但Varghese等分别在 2009年和2010年利用人体终丝组织培养出具有NSCs增殖分化特点的细胞群， 证明终丝组织中有NSCs的存在。这一发现使人们对于NSCs的认识又一次改变。 目前国内对于终丝组织中NSCs研究未见有文献报道，此次实验利用胎儿终丝组 织进行了NSCs的分离培养及鉴定的初步研究，这为终丝中NSCs的分离培养提 供了一定的参考。 目的 1、通过原代悬浮培养的方法对胎儿终丝组织中NSCs进行分离培养并对培 养出的细胞进行Nestin鉴定，表达阳性者为NSCs，从而证明终丝组织中存在 NSCs。 2、通过对不同胎龄终丝及TCS患儿的病变终丝进行NSCs的分离培养来比 较不同终丝组织中NSCs的增长和分化的特点。 3、通过对胎儿终丝组织中NSCs的体外分离培养的观察，分析表皮生长因 及分化的影响。 材料和方法 终丝组织进行NSCs的原代分离培养，培养过程中用倒置显微镜定期观察NSCs的 生长情况，计数神经球的数目比较三组Jlfi)L终丝中NSCs的生长特点。取一定数 组NSCs生长情况，之后用胎牛血清进行诱导分化，用免疫细胞化学的方法鉴定 对NSCs增长和分化的影响。 摘要 的术中切除的病变终丝，术前与家属沟通后征得其同意，上报医院伦理委员会 批准同意后进行实验研究，通过观察病变和『F常终丝组织中NSCs增长和分化的 情况，比较不同类型终丝组织中NSCs的分离培养和分化的特点。 4．实验结果的统计学分析采用SPSS17．0统计软件包进行处理分析。实验 检验，以a=0．05为检验水准。 结果当日禾 1．对终丝中分离培养出的细胞在倒置显微镜下进行形态学观察，发现其具有 NSCs形态特点，将培养出的细胞经Nestin鉴定其表达为阳性，说明培养出来的细 胞为NSCs。 2．不同胎龄终丝组织中培养出的NSCs数量不同，对三