酶与蛋白质工程第4章基因表达与蛋白质分离纯化教程.pptVIP

第四讲 基因表达与蛋白质分离纯化 Escherichia coli E.coli常与一些食源性疾病有关，但从人体肠道内分离出来的两种命名为K-12和B的良性大肠杆菌菌株却是两种重要实验用菌株。大肠杆菌K-12的基因组的测序工作已于1997年完成。大肠杆菌B菌株自1918年被分离出来后，在1959年被分离为两类实验用菌株：REL606和BL21(DE3)，后者在医学和工业上用于生产蛋白质 由美国、韩国和法国的科学家组成的研究小组完成了对两种实验室常用的大肠杆菌(E.coli)菌株基因组的测序工作，发表在《Journal of Molecular Biology》 (2009) 基因组大小4.6M bp 载体分类 克隆载体：携带插入外源片段的质粒或噬菌体 表达载体：就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、终止子等），使目的基因能够表达的载体 （１）复制起始点 （２）选择性基因（一般为抗生素抗性基因） （３）强的、可诱导的启动子 （４）强的转录终止序列 （５）核糖体结合位点 （６）合适的多克隆位点 基因的融合 采用DNA重组技术将不同基因或基因片段融合，经合适的表达系统表达后，可获得由不同功能蛋白拼合在一起而形成的新型多功能蛋白 构建融合蛋白的基本原则：将第一个蛋白基因的终止密码子删除，再接上带有终止密码子的第二个蛋白或多肽基因，即可实现两个基因的融合表达 为蛋白