第十二章基因工程育种方案.pptVIP

　(1) 小规模制备质粒DNA进行限制性酶切分析 七、基因重组菌的培养 (一）工业使用的基因工程菌应具备的条件 1、重组的工程菌最好是分泌型菌株。 2、菌株能利用常用的碳源，并可进行连续发酵。 3、菌株必须是不致病的，也不产生内毒素。 4、发酵所产生的热量和需氧量都低，发酵温度是适当。 5、代谢控制容易进行。 6、重组菌形状稳定。 （二）重组DNA实验准则 1974年，有人提出了DNA重组实验具有潜在生物危险性时问题。后来，美、日等都制定了有关DNA重组实验的准则，这些准则参照了防止病原微生物污染的措施，以及根据对实验安全度的评定采用物理密封(P1～P4)和生物学密封(BI和B2)两种方法。 1、物理密封 物理密封是将重组菌封闭于设备内，以防止传染给实验人员和向外界扩散。 实验规模在20L以下时，物理密封由密封设施、实验室设计和实验注意事项组成。密封程度分为P1、P2、P3和P4级，数字越大，密封水平越高。 2、生物学密封 生物学密封要求用只有在特殊培养条件下才能生存的宿主，同时用不能转移至其它活细胞的裁体，通过这样组合的宿主裁体系统，可以防止重组菌向外扩散。按密封程度分BI和B2级，B2级的密封要求最严格。 进行重组菌培养时的设备标准有LS-1和LS-2。LS-2相当严格，工业生产起码应在LS-1的设备标准下培养。LS-l标准要点是： (1) 使