第5章植物细胞制药(三)解说.pptVIP

第七节 进展与展望 20世纪90年代以来，对于植物细胞及其代谢产物的研究进入了新的发展时期，并出现了很多新技术和新方法，比如诱导子、前体饲养、两相培养法、质体转化、毛状根和冠瘿瘤组织培养等，显示了植物细胞培养工程制药的广阔发展前景。 一、诱导子在植物细胞工程研究中的应用 利用诱导子进行有目的的次生代谢产物调控及生物合成，成为大幅度提高培养物中代谢产物含量的重要方法之一。 诱导子（elicitor），是植物抗病生理过程中诱发植物产生植物抗毒素和引起植物过敏反应（hypersensitive reaction, HR, 亦称抗性反应或自身防御反应）的因子，包括侵染植物的微生物及植物细胞内的分子。 诱导子在植物与微生物的相互作用中，能快速、高度专一性地诱导特定基因的表达。 诱导子可作为研究植物次生代谢信号识别及其细胞内信息传递的良好实验体系。 1.诱导子的分类 （1）定义 植物抗毒素是指在植物防御系统内能对抗微生物进攻的某些次级代谢产物，根据其功能又可称为后感染防御物质。 触发形成植物抗毒素信号的物质称为诱导子，能够诱导植物细胞中的一个或几个反应，并能形成特征性自身防御反应的分子。 诱导子可分为内源性诱导子和外源性诱导子（根据细胞内或外形成），或分为生物诱导子和非生物诱导子。 生物诱导子是指植物在防御过程中为对抗微生物感染而产生的物质。 所有不是植物细胞中天然成分但又能触发形植物抗毒素信号的因子称为非生物诱导子。 （2）内源性诱导子 内源性诱导子主要指来自植物细胞的分子，多为植物细胞壁在微生物作用下的降解产物（如复杂多糖、糖蛋白）及沉积在细胞壁上的木质素。 多糖类又分为纤维素、半纤维素及果胶类。 （3）外源性诱导子 外源性诱导子亦称真诱导子（genuine elicitor），是指病源微生物在入侵植物时自身被降解的产物及其代谢产物。目前应用最多的是真菌诱导子，根据其结构可分为4类。 多糖类　　脱乙酰几丁质是真菌细胞壁被几丁质酶酶解的产物，是广泛使用的多糖类诱导子，它可诱导植保素的产生。木质素类及蛋白酶抑制剂，如大雄疫霉（Phytophthora megasperma）是由大雄疫霉细胞壁分离得到的多糖类诱导子，也是最常用的诱导子之一。 ② 糖蛋白类　　作为微生物细胞壁组成成分之一的糖蛋白类，可诱导引发防御反应。如在Lucene悬浮培养细胞中加入来源于植物病原性真菌的α和β-糖蛋白可产生具抗菌作用的次生代谢产物。 ③ 蛋白质类　　包括一些酶类及具蛋白性质的物质如绿色木霉中的纤维素酶作为诱导子在Grapnine（真诱导子）的悬浮培养中可引起HR反应，另一来源于隐地疫霉的具有蛋白质性质的诱导子亦能诱导HR反应并大量积累植保素cryptogeion。 ④ 不饱和脂肪酸类　　不饱和脂肪酸类作为一种诱导抗性反应的诱导子，对其研究不是很充分，但已发现多聚不饱和脂肪酸（花生四烯酸）及其部分酯类可诱导马铃薯植保素risnitin和lubimin的产生。 2.诱导子的作用机制 诱导子在植物中的具体作用机制尚未形成一套详尽的理论体系。 非生物诱导子（外部培养条件）协同诱导可增加特征酶群活性。 生物诱导子除引起植物在其局部浸染部位做出迅速的过敏反应外，还诱导植物产生植保素，使植物得以免遭病原微生物的侵染和破坏。在此激活过程中，诱导子与细胞膜上受体的结合，改变了膜离子通道，促使诱导过程迅速完成。 不同的诱导子可通过植物表面的不同部位而起作用，也是激活反应中有关基因的表现。 3.诱导子在组织和细胞培养及其次生代谢产物生合成研究中的应用 将诱导子应用于植物细胞培养中以提高目的产物产量，这些诱导子包括： 　　（1）糖蛋白类诱导子：如在培养基中加入糖基化的氧化牛血清白蛋白（BSA）和氧化溶菌酶可使烟草叶产生抗原性尼克碱次生代谢产物的产量增加10倍。 　　（2）蛋白质类诱导子：使用果胶酶及链状蛋白酶作为诱导子来调节烟草细胞培养中酪胺代途径中某些的酶的活性。 　 （3）多糖类诱导子： 用不同的诱导子，如镰刀霉菌丝体、乙烯、水杨酸、几丁质和脱乙酰几丁质及其低聚糖，分别作用于多种模型植物上，结果表明用植物病原体镰刀酶感染植株可诱导产生几丁质酶及其同工酶，并表达了强效抗病原体的细胞溶解活性，说明植物可识别病原体并可被诱导产生抗病原体的几丁质酶。天然多糖如几丁质、脱乙酰几丁质及其低聚糖也具有强效细胞溶解活性的几丁质酶及其同工酶的各种功能。另外，多糖类诱导子除诱导改善植物次生代谢产物的产量外，还可通过多糖的胶化性质改变植物细胞膜的通透性及流动性。 （4）微生物类诱导子：通常是真菌诱导子，方法是将其悬浮培养的菌球匀浆处理，再将浆液高压灭菌处理，弃去残渣，得提取物或无菌真菌菌丝体粗提物.在无菌条件下将匀化产物加入到来源于不同组织、器官的细胞悬浮培养物中，同时作出作用时间