蛋白质修饰解说.doc

Chapter 6 蛋白质化学修饰 翻译后修饰发生规律是理解蛋白质复杂多样的生物功能的重要前提。 蛋白质药物在使用中出现的问题 ？？？ 药用蛋白质受制约抗原性、半衰期） (尤其是小分子蛋白质)，无法充分发挥其生物功能。 那么，降低药用蛋白的抗原性，延长半衰期，确保生物活性的方式： 化学修饰 蛋白质交联 基因突变方式 (图)改变目的蛋白性质的修饰方式 第一节 概 论 ■ 蛋白质变性或 去折叠 化学结构不发生改变，空间结构破坏 导致蛋白质生物学功能的丧失的过程。 Why? 蛋白质→→→重要的生物大分子→→→生命活动的主要承担者 蛋白质的生物学活性→→→决定于特定的化学结构, →→→还决定于特定的空间结构。 ■ 蛋白质的化学修饰 （Modification-specific）~“装饰” 蛋白质分子化学结构发生的改变。 广义上通过活性基团的引入或除去，使蛋白质一级结构发生改变的过程。。 ■ 蛋白质侧链基团的化学修饰通过选择性试剂(修饰剂)或亲和标记试剂与蛋白质分子侧链上特定的功能基团(功能基)发生化学反应而实现。(DNFB,dinitrofluorebenzene)、 丹氟酰氯:二甲基氨基萘磺酰氯(DNS, dimethylamimno-naphthalene) 苯异硫氰酸酯(PITC, phenyl isothiocyanate) 半胱氨酸残基的测定、二硫键的断裂、侧链基团的保护等 均采用各神方法的化学修饰。 (4)探测蛋白质分子的构象变化和运动性 [利用化学修饰试剂的反应,探测某些基因的暴露程度,以分析蛋白质分子的构象变化,如利用5,5-二硫双(2-硝基苯甲酸,DTNB)测定不同去折叠状态的反应巯基数目,可以探测其去折叠的程度,还可以通过监测A412随时间的变化探测去折叠的动力学。] (5)利用亲和标记探测活性部位局部区域的构象状态 [有些化学试剂可专一性地修饰酶的活性部位的侧链基团,从而在活性部位引入探测基因(如具有荧光性或顺磁性基团),以探明活性部位的构象状态及构象变化。] (6)探索蛋白质和酶作用的化学机理 [通过化学修饰可以探明哪些侧链基团参与了酶的催化作用,为探明其作用的化学机理和催化历程起了重要的作用,也为药物设计提供了分子基础] (7)利用共价交联技术研究蛋白质分子的拓扑学、构象的运动性以及寡聚蛋白质的亚基结合状态。 (8)利用蛋白质晶体的重金属衍生物(也属于一种化学修饰),进行X衍射晶体结构分析。 (9)用于蛋白质和酶分子的固定化 [在蛋白质和酶分子的固定他技术中，除部分用物理方法固定外,主要的还是采用化学方法的固定化。其本质是蛋白质和酶的比学修饰，其中包括中包括载体偶联法和共价交联法。这类化学修饰希望只修饰非必需幕闭,设法避免必需基团的破坏,以保持蛋白质和酶的活性。] (1O)定向改造蛋白质分子的性质 [用基因定点突变技术,改变蛋白质主链的化学结构,在蛋白质的肽链结构中删去、替换或增加某些aa残基,以研究其结构与功能的关系,并可定向地进行蛋白质的改造。 此外,还可以通过侧链基团的化学修饰,改造蛋白质分子的性质,如使其激活、失活,或使其稳定性提高等。] 蛋白质化学修饰→→→一种有效的研究手段 →→→广泛地应用于基础性研究和应用研究。 ■ 蛋白质错综复杂三维结构的影响： 蛋白质分子的所有AA残基的侧链基团分布于蛋白质分子的各个部分。有的残基处于蛋白质分子的表面,易于受到试剂的进攻和作用,有的残基则内埋于蛋白质分子的疏水内环境.不易与试剂接触和反应, 即使都处于能与试剂作用部位的同类基因,由于它们所处的化学微环烧不间,因此与试剂作用反应速度也不相同。 那么，不同的研究目的,对化学修饰反应发生的部位也有一定的要求。 【例】若需测定某一蛋白质的表面可反应巯基数, 那么修饰试剂(如DTNB)与蛋白质的反应需在天然条件下进行,避免因变性引起深度修饰反应的发生。 若需要测定蛋白质的总巯基数,则应在变性条件下(如在8mol/L脲或盐酸胍溶液中),使蛋白质分子充分去折叠而使其所有的内埋巯基都充分地暴露出来,以便试剂与之作用。 有的化学修饰反应需专一性的发生于蛋白质分子的某一特定部位 【例】要专一位修饰酶分子的活性部位侧链基因，这时就需对化学修饰试剂本身有特定的要求,使其能专一性标记于酶的活性部位，常用的修饰方法是亲和标记。有的研究工作希望化学修饰后引起酶的失活；有的则希望化学修饰后保持酶的活性.因此在进行化学修饰时,应视不同要求来选择试剂和控制反应条件。 ■ 修饰蛋白质研究是“冰山的一角” Why？？？ ★翻译后修饰蛋白质的化学计量值低、复杂性大。基因转录产物mRNA 的可变剪接以及翻译中和翻译后修饰导致了基因产物的多样性。 【例】人类基因组包含大约30 000个平均每1个可阅读框可产生5～