第7章原核基因表达调控解说.ppt

* 7.3.1 色氨酸操纵子的结构 调节基因(trpR)与结构基因不紧密连锁。 操纵基因在启动子内。 启动子和结构基因不直接相连，被前导序列(trpL)所隔开。 前导序列编码前导肽和弱化子(衰减子)。 trpD trpC trpB O P trpE trpA 结构基因 操纵基因 trpL:编码前导序列 编码前导肽 衰减子 trpR * 7.3.2 色氨酸操纵子可阻遏的负调控 trpD trpC trpB O P trpE trpA 启动子 操纵基因 trpR 脱辅基阻遏 蛋白单体 二聚体 Trp是辅阻遏物 低浓度Trp或缺乏Trp时，脱辅基阻遏蛋白没有活性，不能与操纵基因结合，结构基因转录。 mRNA * trpR 启动子 trpD trpC trpB O P trpE trpA 操纵基因 二聚体 高浓度Trp时，Trp与脱辅基阻遏蛋白结合，使其具有结合操纵基因的构象，阻遏结构基因转录。 脱辅基阻遏蛋白单体 trp 阻遏蛋白二聚体 阻遏基因转录 * trpR trpD trpC trpB O P trpE trpA 脱辅基阻遏 蛋白单体 mRNA trp 分枝酸 二聚体 阻遏蛋白二聚体 阻遏基因转录 * 7.3.3 弱化子与前导肽 弱化子又称衰减子是DNA中可导致转录过早终止的一段核苷酸序列。 在trp mRNA 5端trpE基因的起始密码前有一个长162 bp的mRNA片段被称为前导区。 当mRNA合成起始以后，除非培养基中完全没有色氨酸，转录总是在这个区域终止，产生一个仅有140个核苷酸的RNA分子，终止trp基因转录。 转录终止发生在这一区域，并且这种终止是被调节的，这个区域就被称为弱化子。 1)弱化子 * 2)前导肽及前导mRNA序列 衰减作用需要负载tRNATrp参与，这说明前导序列的某些部分被翻译了。 前导序列中包括起始密码AUG和终止密码UGA。 如果翻译起始于AUG，将产生一个含有14个氨基酸残基的多肽。这个假设的多肽被称为前导肽。 在前导肽的第10和第11位上有两个相邻的色氨酸。 结构基因起始密码子前有162个碱基，其中由139个碱基构成前导区。 前导区mRNA可分为4个富含GC的区段，相邻的区段之间可形成茎环结构。类似于终止子的二级结构，可达到转录终止的目的。 * * 3)弱化机制 当色氨酸浓度低时，生成的tRNATrp量就少，使核糖体沿mRNA翻译移动的速度慢，赶不上RNA聚合酶沿DNA移动转录的速度，这时核糖体占据1位的机会较多，使1-2不能配对，2-3配对，阻止了3-4生成终止信号的结构，trp操纵元处于开放状态。 当色氨酸浓度增高时，核糖体沿mRNA翻译移动的速度加快，占据到2段的机会增加，2-3配对的机会减少，3-4形成终止结构的机会增多，转录减弱。 当所有氨基酸都不足时，核糖体翻译移动的速度就更慢，甚至不能占据1的序列，结果有利于1-2和3-4发夹结构的形成，于是转录停止。 * * 7.4 其他操纵子 大肠杆菌半乳糖操纵子位于其遗传图17 min处，包括3个结构基因：异构酶(galE)、半乳糖-磷酸尿嘧啶核苷转移酶(galT)、半乳糖激酶(galK)。 这3个酶的作用是使半乳糖变成葡萄糖-1-磷酸。 galR(调节基因)与结构基因及操纵区O离得很远，而galR产物对galO的作用与lacI-lacO的作用相同。 gal操纵子的特点： 有两个启动子，其mRNA可从两个不同的起始点转录； 有两个O区，一个在P区上游-67~-73，另一个在galE内部。 7.4.1 半乳糖操纵子 * 1)cAMP-CRP 对 gal 启动子的作用 半乳糖的利用效率比葡萄糖低，可能有葡萄糖存在时半乳糖操纵子不被诱导。 实际上有葡萄糖存在时，gal操纵子仍可被诱导。 一类突变株能在不含葡萄糖的培养基中高水平合成半乳糖代谢酶类。另一类突变株中，gal基因的表达完全依赖于葡萄糖。 gal操纵子P-O区的碱基序列中有两个相距仅为5bp的启动子，gal操纵子可以从两个启动子分别起始基因转录，每个启动子拥有各自的RNA聚合酶结合位点S1和S2。 cAMP-CRP对从S1和S2起始的转录有不同的作用。 * 从S1起始的转录只有在培养基中无葡萄糖时才能顺利进行，RNA聚合酶与S1的结合需要半乳糖、CRP和较高浓度的cAMP。 cAMP-CRP抑制从S2的转录而刺激从S1的转录。 当有cAMP-CRP时，转录从S1开始，当无cAMP-CRP时，转录从S2开始。 从S2起始的转录则完全依赖于葡萄糖，高水平的cAMP-CRP能抑制由这个启动子起始的转录。 cAMP-CRP有利于RNA聚合酶-S1区复合物形成开链构象，从而起始基因转录。 同时，由于S1和S2区的核苷酸部分重叠，这一复合物的存在干扰了RNA聚合酶