10.02.02高生物《专题2课题1 微生物的实验室培养》.docVIP

课题1 微生物的实验室培养 复习目标： 1．培养基的种类、营养和配制方法 2．无菌技术 3．纯化大肠杆菌以及菌种的保藏 复习重点： 1．无菌技术 2．纯化大肠杆菌 复习难点： 纯化大肠杆菌 课时安排： 1．5课时 【基础知识整合】 一、培养基的种类、营养和配制方法 1.培养基按照___物理性质___可分为液体培养基和固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂___琼脂___后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成___肉眼可见___的___菌落___。 2.各种培养基一般都含有水、___碳___源、___氮___源和无机盐四种营养物质。满足微生物生长还需要适宜的___pH___(培养霉菌时需要将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至___中性___或___微碱___性)、氧气的要求(根据微生物的需求提供有氧或无氧环境)、___特殊营养___物质(如培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加___维生素___等)。 3.制作牛肉膏蛋白胨固体培养基 (1)方法步骤：___计算___、称量、溶化、___灭菌___、___倒平板___。 (2)倒平板操作的步骤： ①将灭过菌的培养皿放在___火焰旁___的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。 ②右手拿锥形瓶，将___瓶口___迅速通过火焰。 ③用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10～20mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。 ④等待平板___冷却凝固___，大约需5～10min。然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上。 二、无菌技术 1.获得纯净培养物的关键是防止外来___杂菌___的入侵，要注意以下几个方面： ①对实验操作的___空间___、操作者的___衣着___和___手___进行___清洁___和___消毒___。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行___灭菌___。 ③为避免周围环境中微生物的污染，___实验操作___应在酒精灯___火焰附近___进行。 ④实验操作时应避免___已经灭菌___处理的材料用具与___周围___的物品相接触。 2.消毒与灭菌的区别 消毒指使用较为___温和___的___物理___或___化学___方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体___有害___的微生物(不包括___芽孢___和___孢子___)。消毒方法常用___煮沸___消毒法，还有化学药剂(如酒精、氯气、___石炭酸___、___煤酚皂___等)消毒、___紫外线___消毒。 灭菌则是指使用___强烈___的理化因素杀死物体内外___所有___的微生物，包括___芽孢___和___孢子___。灭菌方法有___灼烧___灭菌、___干热___灭菌、___高压蒸汽___灭菌。 三、纯化大肠杆菌以及菌种的保藏 1.纯化大肠杆菌 (1)微生物接种的方法最常用的是___平板划线___法和___稀释涂布平板___法。 (2)平板划线法是通过___接种环___在琼脂固体培养基表面___连续划线___的操作。 (3)稀释涂布平板法是将___菌液___进行一系列的___梯度___稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到___琼脂固体___培养基的表面，进行培养。分为___系列稀释操作___和___涂布平板操作___两步。 (4)用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在一起的微生物___分散___成单个___细胞___，从而能在培养基___表面___形成单个的___菌落___。 (5)平板划线法操作步骤： ①将接种环放在火焰上___灼烧___，直到接种环___烧红___。 ②在火焰旁___冷却___接种环，并打开盛有菌液的试管的棉塞。 ③将___试管口___通过火焰。 ④将___已冷却___的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。 ⑤将___试管口___通过火焰，并塞上棉塞。 ⑥左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条___平行线___，盖上皿盖。注意不要划破___培养基___。 ⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的___末端___开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意___不要___将最后一区的划线与第一区相连。 ⑧将平板___倒置___放入培养箱中培养。 (6)涂布平板操作的步骤： ①将___涂布器___浸在盛有酒精的烧杯中。 ②取___少量___菌液(不超过0.1mL)，滴加到培养基表面。 ③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上___引燃___，待酒精___燃尽___后，___冷却___8～10s。 ④用涂布器将菌液___均匀___地涂布在培养基表面。 2.菌种的保存 (1)对于频繁使用的菌种，可以采用___临时___保藏的方法。