银杏复方制剂对脾虚鼠消化酶活性的影响研究.docVIP

银杏复方制剂对脾虚小鼠消化酶活性的影响研究 龙岩学院生命科学学院06级动物医学班 王千金 摘要：采用日龄一致，体重大致相近的KM种雌性小鼠为试验材料，研究银杏复方制剂对脾虚小鼠小肠消化酶活性的影响。结果表明：银杏复方制剂显著提高了脾虚小鼠学小肠消化酶的活性，说明对脾虚小鼠的脾虚有明显的改善。 关键词：银杏叶；复方制剂；脾虚；消化酶 银杏树（Ginkgo biloba）是世界上残存的最古老的植物之一[1]。银杏别名公孙树,系银杏科银杏属落叶乔木,是中国的特种植物, 70%的银杏资源产于中国。银杏的药用价值主要是在其叶和果实，银杏叶被用作药物已有500余年的历史，早在宋朝就使用银杏叶治疗哮喘和支气管炎。银杏叶甘苦涩，平入肺，脾，胃三经敛肺止咳，化湿止泻治胸闷心痛，心悸怔忡，痰喘咳嗽，泻痢，白带,黄芩( scutellaria baicalensis georgi)的干燥根,味苦,性寒,具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎的功效[2]。主要用于治疗湿温，黄疸，泻痢，热痢，高热烦渴，肺热咳嗽，胎热不安。白术，甘、苦、温，归脾、胃经。具有补气健脾，燥湿利水，固表止汗，安胎功能等功效。主治泄泻、痰饮、水肿、黄疸、湿痹、头晕、自汗、小便不利、胎气不安等症[3]。党参具有补中益气，健脾益肺的功效。用于脾肺虚弱，气短心悸，食少便溏，虚喘咳嗽，内热消渴等。《本草从新》记载：“补中益气、和脾胃、除烦渴。中气微弱，用以调补，甚为平妥。用旋转蒸发仪浓缩在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重3000r/min左右离心15分钟在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重1 g 组织蛋白中的淀粉酶(AMS) ,在37 ℃条件下与底物淀粉作用30 min ,水解10 mg淀粉为一个淀粉酶活力单位。 2.5.1实验步骤 测定管 空白管 底物缓冲液（ml）））） 测定管 标准管 空白管 1%组织匀浆（ml） 0.03 0.1mg/ml酚标准应用液（ml） 0.03 爽蒸水（ml） 0.03 缓冲液（ml） 0.5 0.5 0.5 基质液（ml） 0.5 0.5 0.5 充分混匀37℃水浴15分钟 显色剂（ml） 1.5 1.5 1.5 立即混匀，520nm，0.5cm光径比色，空白管调零，测各管吸光度。 2.7小肠的脂肪酶的测定 将1 g 组织蛋白中的脂肪酶(LPS) , 在37 ℃条件下与底物反应1 min ,每消耗1μmol 底物为一个淀粉酶活力单位。 2.7.1将底物缓冲液，37℃预温5分钟以上。 2.7.2将分光光度计于420nm处以Tris缓冲液调零。 2.7.3往相应的编号试管内加入0.025ml20%的组织匀浆，再键入试剂四0.025ml，然后用5ml加样器吸取4ml预温的底物缓冲液冲入试管中，迅速用冰箱保鲜膜盖住管口，再用拇指摁住，立即颠倒混合5次（切勿过分用力放振摇，以免引起气泡）。 2.7.4迅速导入比色皿中在分光光度计420nm处比浊，读取吸光度值（A1值） 2.7.5将此比色液倒入原试管中置37℃准确水浴10分钟，再用上法比色读取吸光度值（A2值） 2.7.6求出2次吸光度差值（△A= A1 -A2）） 注意点： 20%组织匀浆的制备：准确称取组织湿重，按照重量体积比1：4（克：毫升）的比例加入生理盐水，冰浴中进行匀浆，然后2500转/分离心10分钟,取上清液进行测定。 比色皿每次比色前要用温蒸馏水洗涤干净后再进行下次比色。 因水浴时间只有10分钟，所以待测试管最好每批不要超过3支，否则来不及做。 2.8小肠的胰蛋白酶的测定 在PH8.0，37℃条件下，每毫克蛋白中含有的胰蛋白酶每分钟使吸光度变化0.003即为一个酶活力单位。 2.8.1实验方法 反应温度：37℃；反应时间：20分钟；比色：0.5cm光径石英比色皿，253nm蒸馏水调零。 试剂名称 空白 测定 胰蛋白酶底物应用液（ml） 1.5 1.5 37℃预温5分钟 样本（ml） 0.015 样本匀浆介质（ml） 0.015 2.9数据处理 采用Excel软件进行分析方差分析，结果以平均值±标准差表示。 3.结果与分析 小鼠小肠（十二指肠、空肠、回肠）消化酶的影响见表1、2、3. 表1： 十二指肠 淀粉酶 碱性磷酸酶 脂肪酶 胰蛋白酶 对照组 试验组 模拟组 0.081±0.0046 0.073±0.004A 0.069±0.004B 207.2±28.9 128.5±13.2A 104.7±3.8B 163.4±20 136.5±15