水处理生物学第三章细菌的生长和遗传变异-1分解.pptVIP

第三章 细菌的生长和遗传变异 主要内容 3-1 细菌的生长及特性 3-2 细菌的遗传与变异 ①涂片染色法 计数器(血球计数板）测定法 ②滤膜染色法 一定量样品过滤到滤膜上，然后染色计数。 需要知道滤液的体积和滤膜的面积。 在显微镜下计数，方法相同。 ③比例计数法 比例——样品菌液与等体积（或成一定比例）的血液混合，观测二者比例 有必要区分细菌的死活吗？ 饮用水中卫生细菌学标准是TBC100个/mL（平板计数的标准），如果我们采用染色显微镜检测技术对刚刚加氯消毒的饮用水进行检测，可能会发现细菌数量会远远超过100个/mL，是不是饮用水就是不合格的饮用水呢？ 吖啶橙（AO）染色直接计数（AODC） 吖啶橙染色直接计数法（AODC）：水样采集后迅速加入甲醛固定，甲醛最终浓度2%；取10mL固定后水样加入0.5mL0.2%吖啶橙（Acridine Orange，Sigma公司）染色1~2min.；将染色水样经滤膜（孔径0.2μm，直径25mm，黑色聚碳酸脂滤膜，Nuclepore公司）过滤；过滤后将滤膜置于载玻片上，用落射荧光显微镜（日本Nikon，EF-D型）计数视野中发橙色或绿色荧光的菌体；显微镜光源为200W汞灯，激发光滤光片为450~490nm，光束分离滤光片510nm，阻挡滤光片520nm。 BacLight染色直接计数法(一种核酸探针 ) BacLight染色直接计数法：将试剂按照产品要求配制后，取2mL固定后水样加入60μL所配BacLight染色试剂，避光培养15~20分钟；然后按照AODC处理方法制片，观察计数视野中发红色或绿色荧光的菌体。所用滤光片波段同AODC相同。 镜检计数视野中发绿色荧光的菌体 为活菌。 N.A.法 向水样中加入0.002%萘啶酮酸（NA，Nalidixic Acid，Fluka公司）和0.025%酵母膏（均为最终浓度），避光，25℃培养6h，然后2%甲醛固定，再按照AODC法直接镜检计数。视野中长大或变粗的菌体被认为是活菌。 CTC染色直接计数——活菌计数 将0.2mL1.67%的CTC加入10mL水样中（CTC最终浓度1mM），避光室温培养4h，然后2%甲醛固定，再按照AODC法直接镜检计数视野中的红色菌体。 (4)统计－查表－计算 ①统计数量指标的确定 根据不同稀释度变黑试管，得到三位数及其中最低稀释度 取重复管数都有菌生长的最高稀释度的生长管数，为数量指标的第一位数字，后面两个稀释度的生长管数后两位数提问：上例情况而言统计数量是几？ 320 10-4 MPN三管法测数统计表（个菌/毫升） ①制标准曲线（OD~No） ②测菌液浊度，查图表得出细菌数量 Fig. 1 Bacteria growth with different phosphorus (0～3μg/L) and 10μgAOC/L 3-1-4 微生物膜的生长特性 1. 生物膜的生长 第一次作业 请绘制间歇培养模式下的细菌生长曲线并说明各个生长阶段底物和细菌生长的特点。 2、间接计数法——一种活菌计数法 ②滤膜法：过滤到滤膜上（把膜放在固体培养基上培养），然后把滤膜贴到培养基上，细菌获得营养而生长，形成菌落。——大肠菌群测定 2、间接计数法——一种活菌计数法 ③液体计数法（MPN法，most probable number法）最可能数法 特点：液体培养、统计学查表计数 主要用于不能在平板培养基上形成菌落的菌 （硝化菌、反硝化菌、硫酸还原菌） 将菌接种于液体培养基，经过一段时间培养，采用一定的技术来检测是否有细菌生长。例如硫酸盐还原菌的检测是利用它们生长时产生的硫化亚铁黑色特征进行检测，按MPN法进行计数。