微生物实验汇编.doc

微生物学大实验 班级： 姓名： 学号： 1.培养基的配置及消毒灭菌 1.1通用培养基的配制（液体、固体、半固体三种） 1.1.1实验目的 （1）了解配制微生物培养基的原理和培养基的种类。 （2）掌握配制微生物通用培养基的一般方法和操作步骤。 1.1.2实验原理 培养异养细菌最常用的培养基是牛肉膏蛋白胨培养基，它是一种天然培养基。牛肉膏是牛肉浸液的浓缩物，含有丰富的营养物质，它不仅能为微生物提供碳源、氮源，还含有多种维生素。蛋白胨是酪蛋白、大豆蛋白或鱼粉等经蛋白酶水解后的中间产物，含有?、胨和氨基酸等丰富的含氮素营养物，因此完全能满足大多数异养细菌对营养的需要。 1.1.3材料和器皿 （1）试剂：牛肉膏、蛋白胨，NaCl，1mol/LNaOH,1mol/L HCl。 （2）器皿：台秤，玻璃烧杯，搪瓷烧杯，三角瓶，量筒，漏斗，试管，玻璃棒等。 （3）其他：pH试纸，牛角匙，牛皮纸，棉花，纱绳，灭菌锅等。 1.1.4方法和步骤 1.配制牛肉膏蛋白胨培养基 （1）配方及配量：牛肉膏1.5g，蛋白胨5g，NaCl2.5g，琼脂（固体6g 半固体0.4g 液体不加）蒸馏水500ml （2）称取药品：按照营养基配方与配量分别称取各药品，取少于总量的水于烧杯中，将培养基成分（琼脂除外）逐一加入水中待溶。 （3）加热溶解：将烧杯放在石棉网上，用文火加热，并不断用玻璃棒搅拌，使各药品快速溶解，然后补水至500ml。 （4）调节pH：用1mol/l NaOH 调pH至7.2—7.4.避免调过碱，应缓慢加入，边加入边搅拌，并用pH试纸测酸碱度值。 （5）） 结果总体上来说算不错，穿刺线形状如玻璃棒，有扩散现象；边缘不整齐，这说明了大肠杆菌有鞭毛，可运动。 2.1.5注意事项 （1）半固体培养基琼脂的用量依据琼脂牌号不同而定的。其硬度的判断，以培养基冷却凝固后，用手轻敲即碎为准。为使培养基透明而不浑浊，配置的培养基必须过滤。 （2）接种前应该将接种针拉直，穿刺时手要平稳，不可左右摆动。 （3）穿刺接种时，接种针不可穿透培养基。 2.2液体接种法 2.2.1实验目的 掌握利用各种接种工具进行液体接种的步骤及方法。 观察细菌在液体培养时的群体特征。 2.2.2实验原理 在无菌操作条件下，用无菌的接种环、滴管、移液管或移液枪等接种工具将斜面菌种或菌种悬液移接到液体培养基中的一种方法。在定量接种时可用移液管进行。 2.2.3方法与步骤 接种环接种 1、接种前准备 （1）标明菌名 （2）4、适温培养:将试管插于试管架上，置于37℃恒温箱中，培养24h后取出，观察细菌在液体培养基中的生长特征，并记录结果。 2.2.4实验结果 没摇动前，液面微浑浊，有一层菌膜覆盖， 且管底有大量菌体沉淀，摇动后观察到液体有絮状 浑浊。 3. 大肠杆菌菌种分离的三种方法（平板划线法、平板涂布法和倾注法） 3.1平板划线法 3.1.1实验目的 了解平板划线法分离菌种的基本原理，并熟练掌握其操作方法。 3.1.2实验原理 平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。一般是将混杂在一起的不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面上作多次划线稀释，形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。通常认为这种单菌落就是某微生物的纯种。实际上同种微生物数个细胞在一起通过繁殖也可以形成一个单菌落，故在科学研究中，特别在遗传学实验或菌种鉴定工作中，必须对实验菌种的单菌落进行多次划线分离，才可获得可靠的纯种。 具体的划线形式有多种，现在主要说一种，将一个平板分成A、B、C、D4个面积不同的小区进行划线，A区面积最小，作为待分离菌的菌源区，B和C为经过初步划线稀释的过渡区，D区则是关键的单菌落收获区，它的面积最大，出现单菌落的概率也最高。由此可见，这4个区的面积安排应该做到DCBA。 3.1.3方法与步骤 1、倒平板 将冷却至50℃左右的培养基按无菌操作的方法倒入平板中，平置，待凝。 2、做分区标记 在皿底用笔划出4个不同面积的区域，使DCBA，且各区的夹角应为120°左右，以便使D区与A区所划出来的线条平行、美观。 3、划线操作 （1）挑取菌样：选用平整圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量含菌试样。 （2）先划A区：将平板倒置于煤气灯旁，用左手取出平板的皿底，使平板表面大致垂直于桌面，并让平板面向火焰。右手持含菌的接种环，先在A区轻巧地划上3-4条连续的平行线当作初步稀释的菌源。烧去接种环上的残余菌样。 （3）划其余区：将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，并使