糖化血红蛋白(HbA1c)的应用及影响检测的因素分解.ppt

色谱图举例 * 糖化血红蛋白（HbA1c）的应用及影响检测的因素 1958年，Huisman与Meyering用柱色谱首次将糖化血红蛋白从血红蛋白中分离出来。 1968年，Bookchin与Gallop证实糖化血红蛋白的主要成份HbA1c是血红蛋白β亚基的N端与一个己糖相连构成的糖蛋白。 1969年，Rahbar发现糖尿病患者中糖化血红蛋白的含量有增高的现象。 1975年，Bunn等阐明了糖化血红蛋白的生物合成路线。 1976年，Cerami和Koenig等提出用糖化血红蛋白HbA1c作为对糖尿病患者葡糖控制效果的衡量标准的可能性。 HbA1c 历史 概 念 所谓“糖化血红蛋白”并不是单一的物质。血红蛋白有四个亚基，成人内绝大多数为α2β2，这两种亚基都可被糖基化。糖基化可发生在亚基N端的缬氨酸，也可发生在链内的赖氨酸上。各种糖化血红蛋白中，最重要的一种是HbA1c ，即α2 (β-缬-1-脱氧果糖)2。对HbA1c的产生过程的研究已经比较充分。 HbA1c的生物合成中，首先是血红蛋白β亚基N端的缬氨酸的氨基与葡萄糖的自由醛基可逆缩合为醛亚胺（席夫碱），而后醛亚胺发生Amadori重排反应，得到较为稳定的酮胺产物，即HbA1c 。这一糖基化过程不依靠酶的催化。在红血球120天左右的生命周期内，葡糖可不断将血红蛋白转化为糖化血红蛋白。糖基化不是可逆的，血红蛋白一旦糖基化便会在红血球细胞内积累，直到红细胞完成生命周期被代谢掉。因此，糖化血红蛋白可反映在红血球生命周期（即3周到3个月）内血浆葡萄糖的平均浓度，一般认为是6-8周内的血浆葡糖水平。 The IFCC working group has defined HbA1c as Hb that is irreversibly glycated at one or both N-terminal valines of the beta chains. This does not exclude hemoglobin that is additionally glycated at other sites on the alpha or beta chains. Hb HbA1a HbA1b HbA 97% HbF 0.5% HbA2 2.5% HbA0 94% HbA1 6.0% HbA1c 80% 非糖基化 血红蛋白 糖基化 血红蛋白 HB 组 成 HbA1a HbA1b  HbA的次要组分 LA1c (希夫碱) 和氨甲基乙酰化的 Hb 总面积为 100万-500万 A1c 结果 HbA1c A0 主要有三种检测方法: 1.离子交换高压液相色谱（HPLC） 直接分离HbA1c 2.硼酸亲和高压液相色谱 检测产物为总糖化血红蛋白 3. 免疫法 检测产物为HbA1c HbA1c 检测方法 NycoCard ? HbA1c is a boronate affinity assay. The kit contains test devices with a porous membrane filter, test tubes pre-filled with reagent and a washing solution. There agent contains agents that lyse erythrocytes and precipitate hemoglobin specifically, as well as a blue boronic acid conjugate that binds cis-diols of glycated hemoglobin. When blood is added to the reagent, the erythrocytes immediately lyse. All hemoglobin precipitates. The boronic acid conjugate binds to the cis-diol configuration of glycated hemoglobin. An aliquot of the reaction mixture is added to the test device, and all the precipitated hemoglobin, conjugate-bound and unbound, remains on top of the filter. Any excess of coloured conjugate is r