体外放射技术分解.ppt

体外放射分析技术 是指在体外实验条件下，以特异性结合反应为共同的生物学基础，以结合反应动力学为规律为共同的方法学基础，并以放射测量技术为共同的定量手段，对生物活性物质进行超微量定量分析的总称。具有灵敏度高、特异行强、精密度密度好、应用面广、方法简便等突出优点，是核医学中重要技术之一。 放射免疫分析（RIA） 原理:利用放射性核素标记抗原和非标记待测抗原竞争性结合其相应的特异性抗体。 反应条件 标记抗原与非标记抗原具有相同的免疫活性； 特异抗体与标记抗原是恒量； Ag+＊Ag﹥Ab 公式：Ag+Ab Ag?Ab+Ag + ＊Ag ＊Ag ?Ab+ ＊ Ag 如果在不同试管中分别加入已知系列浓度的标准抗原(Ag)在同样条件参与反应，获得各标准浓度管的*Ag·Ab量，并以已知标准抗原的浓度为横坐标，以*Ag·Ab复合物的结合率为纵坐标，可绘制出剂量反应曲线，即为标准曲线或竞争性抑制曲线 。 特点： 竞争性结合分析 采用标记抗原 结合部分放射性活度与待测抗原浓度呈负相关 主要试剂 （1）特异性：指抗体不受交叉反应物质影响的程度。通常由交叉反应率的大小来定量评价。交叉反应率越少，抗体的特异性越好。 （2）亲合力：在放射免疫分析中，亲合力是指抗体与抗原间的结合强度。 （3）滴度：反映该种特异性抗体在血清中的含量，以滴度大的抗血清为好。 二、抗原 最常用的标记核素是125I，其半衰期适中（约60天），既易于商品化与贮存，又有利于废物的处理；125I只发射低能的γ射线（28keV和35keV），容易测量 ； 免疫活性相同； 标记后不改变抗原生物活性； 比活度、放射化学纯度高。 三、标准品 质：与待测物有相同的生物特性； 量：其浓度必须准确。 分离方法 分离抗原抗体复合物（大分子）与游离抗原（小分子）。 免疫放射分析（IRMA） 原理：将放射性核素标记在抗体上，然后以过量的标记抗体与待测抗原结合，将标记的抗体抗原复合物（Ag·*Ab）与未结合的标记抗体分离，通过放射测量可求得待测抗原的含量。免疫放射分析标记的是过量抗体，反应系统是非竞争性的全量结合反应 。 公式 Ag + *Ab Ag·*Ab + *Ab 以已知含量的抗原参与结合反应制作一条标准曲线 ，通过该标准曲线可以刻度待测抗原的含量，这条标准曲线反映剂量与标记抗体抗原复合物结合率为正相关关系，即复合物的结合率随着待测抗原的含量增加而增加。 免疫放射分析特点 非竞争性结合分析 结合部分放射性活度与待测抗原浓度呈正相关 反应达到平衡较快 误差几率小 两种分析方法的比较 标记物在RIA中核素标记抗原，在IRMA中核素标记抗体。 反应速率反应速度与反应物的浓度呈正比，IRMA不存在竞争性结合复杂的反应，所以反应速度较RIA快。 反应模式RIA为竞争抑制，测得放射性的量与受检抗原呈反比。IRMA为非竞争结合，剂量反应曲线为正相关的直线关系。 分析误差RIA中加入的抗体和标记抗原都是定量的，加样误差可严重影响测定结果。IRMA中标记和固相抗体在反应中都是过量的，只有受检标本的加样误差才会影响分析结果。因此，IRMA的批内和批间变异均比较小。 受体放射分析（RBA） 是目前研究受体亲和力和受体数量最基本、最主要的方法。它是应用放射性核素标记配体与特异的受体结合，测定受体的亲和力和数量，也可用作研究受体亚型的方法。 受体放射分析具有灵敏度高，特异性强，专一性好等特点 。 非放射标记免疫分析 化学发光免疫分析 时间分辨荧光免疫分析 * * 10 20 100 1000 0.2 0.4 0.6 0.8 标准曲线浓度 结合率 一、抗体： 关键试剂，它直接关系到分析系统的质量和成败。评价抗体质量的指标有： *