植物保护研究(农业推广硕)摘要.ppt

3、载体两性电解质pH梯度等电聚焦 等电聚焦(isoelectrofocusing, IEF 或EF) 是利用蛋白质分子或其他两性分子的等电点的不同，在一个稳定的、连续的、线性的pH梯度中进行蛋白质的分离和分析。 利用该技术分析的对象只限于蛋白质和两性分子，分析的条件是凝胶中有稳定的、连续的和线性的pH梯度。 根据建立pH梯度原理的不同，梯度分为： 载体两性电解质pH梯度（Carrier ampholytes pH gradients） 在电场中通过两性缓冲离子建立pH梯度 固相pH梯度（immobilized pH gradients） 将缓冲基团成为凝胶介质的一部分，分辨率比前者高一个数量级 等电聚焦是依照等电点(isoelectric point, pI. 蛋白质的净电荷为零时的pH值)的不同将蛋白质分子分离，反之，根据蛋白质在pH梯度中的位置可测得该蛋白质的等电点 4、双向电泳 双向电泳广义的定义是将样品进行电泳后，为了不同的目的在其直角方向再进行一次电泳 双向电泳大都是第一向为等电聚焦，第二向为梯度SDS电泳，样品经过电荷和质量两次分离后，可以得到分子的等电点、分子量等信息。 分离的结果不是带，而是点。这是目前所有电泳技术中分辨率最高，信息最多的技术。 双向电泳的原理图 由于双向电泳的高分辨率，分离的斑点无法用肉眼来比较和辨别，应用凝胶扫描或摄录系统将数据