蛋白质生化技术汇编.ppt

蛋白质芯片-飞行质谱系统及其在分子生物学中的应用 背景介绍 蛋白指纹质谱技术（SELDI，Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization，表面增强激光解吸技术）是 2002年诺贝尔化学奖的核心技术，具有快速、简单和灵敏等优点,它不仅可在肿瘤诊断中用于发现标志物、观察治疗效果,还可用于研究蛋白质的修饰、相互作用、信号传导和酶促调节等,从而实现在蛋白质水平的大规模功能研究。 传统蛋白组学研究（2D-MS）的局限性 由于外加电场下的PH梯度不稳定，重复性差 加样量小，分离的蛋白质很难鉴定 可分析的蛋白质最多约1500种，难以检出蛋白质中占很大比例的低丰度蛋白质 对于分离跨膜蛋白仍是技术难点 电泳胶上的蛋白质斑点很大部分包含一种以上蛋白，以依次鉴定单个蛋白斑点为基础，限制了检测通量 消耗时间长，一次电泳要5小时以上 对技术水平要求高，不能完全自动化 染色转移等环节操作技术条件要求高，耗时，不适应于大规模筛查和临床检测 SELDI技术的优势 直接用粗生物样品（血清、尿、体液）进行分析 同时快速发现多个生物标记物 微量样品 (as few as 2000 cells for LCM samples) 高通量的验证能力（ with 1000s of samples a month） 发现低丰度蛋白质 测定疏水蛋白质: 与“双相电泳