2_土壤中尿素的细菌的分离与计数讲述.ppt

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1.从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 2.统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 课题目的 课题背景 尿素[CO(NH2)2 ]——重要的农业氮肥。 只有被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用。 脲酶 CO(NH2)2 + H2O CO2 +2NH3 尿素分子的立体结构 一、研究思路 (一)筛选菌种 1 实例：寻找耐高温的DNA聚合酶 启示： PCR技术：要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 寻找目的菌种时要根据它对_______________，到相应的环境中去寻找。 生存环境的要求 耐高温的酶 耐高温生物体 耐高温环境（热泉、火山口） 寻找 寻找 Taq细菌 筛选原因: 因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物， 使耐热的Taq细菌保留下来。 2 实验室中微生物的筛选原理 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 思考： 该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 原则上能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。 选择培养基： 在微生物学中，将允许______________________，同时____________________________生长的培养基。 特定种类的微生物生长 抑制或阻止其他种类微生物 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板等方法对它进行纯化培养分离。 如何对细菌进行计数？ 1 显微镜直接计数： 利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 2 稀释涂布平板法（间接计数） 101 102 103 104 105 106 (二)统计菌落数目 方法： 运用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数。 原理： 1个菌落←1个活菌 ①选择菌落数在30～300的平板上计数。 ②需培养计算出三个或三个以上的平板菌落求平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 注意事项： 统计菌落数目的理论依据： 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30～300的平板进行计数。 看课本P22，并讨论你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？ 第一位同学：没有重复实验（至少涂布3个平板） 第二位同学：A组结果误差过大，不应用于计算平均值 说明设置重复组的重要性。第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。这个实例启示学生：在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 每克样品中的菌株数： ＝（C÷V）×M C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积（ml) M：稀释倍数 计算公式： 某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml） ( ) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4 B 每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M (三)设置对照实验 阅读P22～23页“（三）设置对照”一段讨论教材中提出的问题。 设置对照的目的： 排除实验组中非测试因素对试验结果的影响，提高实验结果的可信度。 (1)A同学出现此结果的可能原因？ ⑴土样不同 ⑵培养基污染 (或混入了其他的含氮物质) (2)设置对照实验，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素？ 这个实例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少 方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 结果预测：如果结果与A同学一致，则证明______；如果结果不同，则证明A同学存在__________________ __________ A无误 培养基的配 制