2土壤中尿素的细菌的分离与计数讲述.ppt

专题2 :微生物的培养与应用 精华学校生物组 李秋伶 （一）筛选菌株 自然界筛选：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。(如耐高温的TaqDNA聚合酶) 实验室筛选：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。 测定微生物数量的方法： 1、直接计数法：最常用的显微镜直接计数。 先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。 优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。 缺点：不能区分死菌和活菌； 难以计数微小的细菌。 一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。 如：酵母菌。 （二）统计菌落数目 2、间接计数法：最常用稀释涂布平板计数法 应用：统计样品中活菌的数目 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的 一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 （注意）：一般选择菌落数在30-300的平板进行记数。 ②操作： a、设置重复组：增强实验的说服力和准确性。将待测样品经过一系列的稀释，选择三个稀释度的菌液均匀涂布在平板上，然后培养。 （注意）：为了结果接近真实值，可将同一稀释度菌液涂布到3个或3个以上的平板上，经培养，计算出菌落的平均数。 b、对照原则：判断培养基中是否有杂菌污染，将未接种的培养基同时进行培养。 判断选择培养基是否具有筛选作用，对照培养基接种后培养观察菌落数目。 计算公式：每克样品中的菌株数=（C/V）ⅹM 1、土壤微生物主要分布在距地表 cm的近 土壤中，约 为细菌。 2、分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是 ，其目的是保证获得 的平板。 细菌稀释度为 ， 放线菌稀释度为 ， 真菌稀释度为 。 3～8 中性 70％～80％ 不同微生物在土壤中含量不同 菌落数在30～300之间、适于计数 104、105、106 103、104、105 102、103、104 3、 培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌一般在 ℃培养1～2d， 放线菌一般在 ℃培养5～7d， 霉菌一般在 ℃的温度下培养3～4d。 4、 在菌落计数时，每隔 统计一次菌落数目。选取 时的记录作为结果，以防止因 而导致遗漏菌落的数目。 注意：菌种中有些菌体增殖快，有些菌体增值慢，所以培养时间要充足，使得每个菌体都能形成肉眼可观察到的菌落。 5、菌落的特征包括 等方面。 30～37 25～28 25～28 24h 菌落数目稳定 形状、大小、隆起程度、颜色 培养时间不足 （1）原理：尿素是一种重要的农业氮肥，只有当土壤中 的 细菌将尿素分解成氨之后，才能 被植物利用。尿素细菌能合成脲酶，在脲酶的作用下尿素被分解成氨。 CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3 脲酶 （2）实验设计的内容包括实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。 （3）实验流程： 土壤取样 样品系列稀释 涂布平板与培养