第6章第2节基因工程及其应用汇编.ppt

* * 谁能告诉我这是ＷＨＡＴ？ 基因工程及其应用 第2节 即 。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里， 地改造生物的 。 原 理： 操作水平： 结 果： 基因重组 DNA分子水平 定向地改造生物的遗传性状，获得人类所需要的品种。 基因拼接技术或DNA重组技术 定向 遗传性状 操作环境： 体外 概念： 1、基因工程的“剪刀” 指“ 限制性核酸内切酶 ” 主要存在于微生物 一种限切酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定切点切割DNA分子 已发现的有200多种 种类: 来源: 特点: “ ” 作用于： 3’,5’-磷酸二酯键 结果： 一般产生黏性末端或(平末端) 目的基因 黏性末端 黏性末端 G C T A T A G C T A T A 限制性内切酶（EcoRⅠ）作用过程 　　被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？ 思考: 形成的黏性末端不同 不同的限制酶呢？ 具有 限制酶能否切割RNA和单链DNA？ 2、基因工程的“针线” 指“DNA连接酶” “ ” 作用： 将互补配对的两个粘性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子 连接的部位： 3’,5’-磷酸二酯键 使用DNA连接酶制作重组DNA分子 甲片段 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT 乙片段 GGCATCTTAA AATTCCGTAG 重组DNA分子 Recombinant DNA GGCATCTTAA AATTCCGTAG DNA连接酶的作用过程 　　 DNA连接酶的作用位点是：相邻的两个脱氧核苷酸的切口。即生成：磷酸二酯键。 DNA连接酶的作用过程 （2006.台州质检）下列是由限制酶切割形成的DNA片段，能用相应DNA连接酶将它们恢复连接的组合是 ①…CTGCA …G ②…G …CTTAA ③ G… ACGTC… ④ AATTC… G… A. ①③；②④ B. ①②；③④C. ①④；②③ D.以上都不对 A DNA聚合酶和DNA连接酶的比较 不同点 相同点 DNA聚合酶 DNA连接酶 连接DNA片段 不需要模板 连接的是游离的脱氧核苷酸 需要模板 连接不同脱氧核苷酸之间的磷酸和脱氧核糖，形成磷酸二酯键 常用的运载体(carrying)有两类： 1）细菌细胞质的质粒( plasmid) 2）噬菌体(bacteriophages) 　　　或某些动植物病毒 (virus) 3、基因的运载体 标记基因，便于进行检测。 其中质粒存在于许多细菌和酵母菌等生物中,是细胞染色体外能够自主复制的小型环状DNA分子。　 它们的共同特点是 都有侵染或进入宿主细胞的能力 作为运载体必须具备哪些条件？ 1.能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2.具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3.对宿主细胞无毒害作用。 4.具有某些标记基因，便于进行筛选。 第一步： 第二步： 获取目的基因 目的基因与运载体结合 注意：要用同一种限制酶切取目的基因和运载体，并用DNA连接酶连接。 1、常用的受体细胞： 大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌、动植物细胞等 2、常用微生物作受体细胞的原因： 微生物增殖快、代谢快、目的产物多。 3、若运载体是质粒，受体细胞为细菌应作何处理： 应用CaCl2处理 目的是： 增大细胞壁的通透性 第三步： 将目的基因导入受体细胞 第四步: 目的基因的检测和表达 一般检测： 标记基因是否表达 　　大量的受体细胞接受不多的目的基因。处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。 将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。 无表达产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 　　 1、基因工程与作物育种 生长快、肉质好的转基因鱼(中国) 转基因的紫番茄 2、基因工程与药物研制 我国生产的部分基因工程疫苗和药物 　　许多药品的生产是从生物组织中提取的。受材料来源限制产量有限，其价格往往十分昂贵。 　　微生物生长迅速，容易控制，适于大规模工业化生产。若将生物合成相应药