2-定量PCR-2014研究.pptVIP

相对定量分析方法 相对定量分析方法 目的基因与内参基因的扩增效率是否相近(≤5%)? NO YES ??Ct method 双标准曲线法 相对定量分析 双标准曲线法: 目的基因与内参基因扩增效率不同 相对定量分析 双标准曲线法: 相对定量分析 ? ? CT 法 前提：目标序列和内参序列的扩增效率接近100％且偏差在 5％以内 相对定量分析 实验步骤 目的基因GAPDH样品做五个浓度稀释，做标准曲线 DNA浓度测定 0.025 ng/ul 质粒DNA ①依次4倍稀释 样本稀释： A样本：将①稀释4倍 （取① 4ul +12ul ddH2O ） B样本：将A样本稀释4倍 （取A样本4ul +12ul ddH2O ） C样本：将B稀释4倍 （取B 4ul +12ul ddH2O ） D样本：将C样本稀释4倍 （取C样本4ul +12ul ddH2O E样本：将D样本稀释4倍 （取D样本4ul +12ul ddH2O 参比荧光按照不同品牌/型号Q-PCR仪稀释添加或不加 TaKaRa QPCR试剂盒 质粒DNA 4ul SYBR mixture 10ul RoxII 0.4ul