分离科学GCLCMS说课.ppt

期末总结 1. 色谱法 2. GC 3. LC 4. GC-MS 5. LC-MS 6. MS-MS 目 录 色谱法 1.原理 试样中各组分在色谱柱中的流动相和固定相间不断进行着分配，不同性质的组分在柱中的滞留时间不同，从而使各组分分离。 2.术语 相对保留值 r21 = t′R2 / t′R1 （柱温、固性） 分配系数 K = CS / CM （柱温、固性、试样、k） 分离度 R = 1.5 两峰完全分离标准 3.定性 纯物质：保留值、加入法 保留指数（IX） ：正构烷烃 仪器联用：GC-MS、LC-MS 4.定量------组分含量与峰面积成正比 m = f·A 归一化法：全部出峰 标准曲线法 ：需组分纯物质系列标液制成曲线，适用于大批量样品 内标法：需要标样和内标物，不适合大批量样品 内标物： 试样中不含有该物质； 与被测组分性质接近； 不与试样发生化学反应； 出峰位置应位于被测组分附近。 5.色谱方法分析验证 准确度：多次重复测定 平均值 真值 符合程度 回收率 = (C-A)/B (内标法) 精密度：多次重复测定 测定值 彼此 符合程度 RSD = S / X ￣ 检测限（LOD）：被检出的最低量 信噪比：3:1 定量限（LOQ） ：被定量测定的最低量 信噪比：10:1 线性范围： 气相色谱法 1.结构 2.GC条件选择 载气系统 干燥、净化，H2 、N2 、He 进样系统 进样+汽化 色谱柱 填充柱、毛细管柱 检测系统 TCD、FID 记录系统 色谱工作站 温度控制系统 汽化室、分离室、检测室 进样 手动、自动 气化温度 等于或稍高于样品的沸点 固定相 相似相溶（出峰顺序：非极—沸点低、极性—极性小） 柱温 柱温↑---挥发度↑---低沸点重叠---tR↓；柱温↓---低沸点易分离---tR↑；程序升温 检测器温度 防止冷凝 高效液相色谱法 1.结构 高压输液泵 固定相颗粒极细，必须配备有高压输液系统 进样装置 六通阀、 色谱柱 一般为C18柱 检测器 紫外（可梯洗）、光电二极管阵列、示差折光（不可梯洗）、荧光 过滤装置 防止堵塞、保护仪器 2.LC分离类型 液-液分配色谱 原理 液液萃取 溶解度 类型 正相色谱（流弱） 流出顺序：极性小的先流出，极 性大的后流出 反相色谱（流强） 流出顺序：极性大的先流出，极 性小的后流出 反相色谱 固定相：C18 流动相:甲醇、乙腈、水 极性顺序：水（超纯水）乙腈甲醇 洗脱顺序：水甲醇乙腈 有机相比例减小： 溶剂极性↑---洗脱能力↓---tR↑，R ↑ 梯度洗脱：按一定程序连续地改变流动相的配比和极性，用来优化分离。 离子色谱 原理 利用离子对离子交换树脂的亲和力差异而进行分离 方式 添加抑制柱，降低流动相本底电导影响，提高目标离子灵敏度 离子对色谱 原理 将对离子或加到流动相中，使其与溶质离子结合形成离子对，从而控制溶质离子保留行为 体积排除色谱 原理 基于试样分子的尺寸和形状不同来实现分离 GC-LC 对比 GC LC 流动相 气体 液体 流动相作用 运载 运载与选择分离 适用对象 低沸点、热稳定、中小分子 高沸点、热温差、大分子、强极性 进样方式 高温汽化 六通阀 柱温 较高 室温 检测器 TCD、FID、ECD 紫外、二极管、差示、荧光 GC-MS 联用 1.流程 GC：MS的进样器，纯化样品，提高分析效率 MS：GC的检测器，定性专一 作用：将GC与MS联接，除去载气、降低气压,富集输送试样 直接插入式接口 喷射式分子分离器 进样系统 离子源 真空系统 质量分析器 检测器 2.结构 1.载气：高纯He 2.进样口：分流/不分流、填充柱进样口 3.色谱柱：固定相选择 分流比：液体样品蒸发后，少部分蒸汽进入柱子而大部分从分流 、 吹扫口流出，两者的比例为分流。 EI CI 1.单聚焦 2.四极杆 3.飞行时间 真空原因： 1.氧会烧坏离子源的灯丝； 2.高压会引起放电； 3.引起额外的离子－分子反应，谱图复杂化。 组分 固定相 出峰顺序 非极 非极 沸点，沸点低先出峰 极性 极性 极性，极性小先出峰 混合 极性 极性，非极性组分先出峰 固定相选择 3.MS中离子类型 分子离子 分子失去一个电子所形成的离子，也叫母离子，m/z值为分子质量 准分子离子 加合离子，CI源产生较多，如：[M + H]＋、[M + Na]＋、 [M