细胞生物学的方法绪论.pptVIP

DNA chip技术 第二节 生物化学分析技术 芯片 ?原理及应用： ?利用同位素的电离辐射对乳胶(含AgBr或AgCl)的感光作用，对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究。 ?步骤： ?前体物掺入细胞 （标记：持续标记和脉冲标记） ? 放射自显影 3H: dT U 35S: 蛋氨酸 半胱氨酸 3H,14C: 蛋氨酸 亮氨酸 放射自显影技术与电镜技术结合，也可进行电镜自显影。 五、放射自显影术 常用3H胸腺嘧啶脱氧核苷显示DNA的放射自显影图像 第二节 生物化学分析技术 放射自显影技术与电镜技术结合，也可进行电镜自显影（electron-microscopic autoradiography）。 电镜自显影照片 第三节 细胞生理学技术 一、流式细胞术 二、膜电位检测技术 三、膜片钳位记录技术 一、流式细胞术 可定量地测定某一细胞中的DNA、RNA或某一特异的标记蛋白的含量，以及细胞群体中上述成分含量不同的细胞的数量，并可以分选细胞。 二、膜电位检测技术 细胞的质膜内外两侧由于阳离子浓度不同而形成浓度梯度差（常为外高内低）, 从而在质膜两侧造成一定的电位差，该电位差即称为膜电位(membrane potential)。 膜电位的大小因细胞种类不同而异，范围在 -20~-100mV之间，负值表示膜内与膜外相比为负。 微电极的构造图解 金属丝(镀有氯化银的银丝) 玻璃毛细管 电解质溶液(KCl) 微电极：由用玻璃毛细管拉制成的细管和插入一条金属丝组合而成。 V 电位计 (或示波器) 微电极 细胞膜 核 细胞质 细 胞 V 离子是通过膜上的离子通道（亲水小孔）进出细胞的。为了检测单个特定离子通道的性质和部位，德国马普研究院的E. Neher和B. Sakmann经过长期合作研究，终于在1976年研制成功了可检测极低浓度的无机离子通过膜通道的膜片钳位记录技术。 三、膜片钳位记录技术 该技术的主要技术关键：可记录通过细胞微小质膜片段的微弱电流(1.0~1.2?10-11A)。 (patch-clamp recording) 检测时，用内经约为1?m的玻璃管电极将细胞质膜紧紧吸住，或拉下来，以测定进入管内的离子的种类和数量，从而表明离子通道的性质和功能。 单个离子通道的直径约为0.5~0.6nm，膜电位的变化可引起离子通道的开启或关闭，膜片钳位技术能检测出这种变化。 玻璃管 电极 膜片钳位记录技术中几种常用的实验方法 胆囊炎——Cl-通道； 癫痫——Na+和K+通道； 心血管病——Ca2+通道； 神经失常——Ca2+通道。 E.Neher和B.Sakmann荣获1991年诺贝尔奖 第三节 细胞生理学技术 有些疾病与离子通道失常有关，例如 膜片制导技术对许多因离子通道失常而引起的疾病的诊断和治疗有着重要的应用价值。现在已根据该技术的理论和技术研制出了许多有效的药物。 四、单分子技术与细胞生命活动的研究 三、蛋白质组学研究 二、模式生物及突变体的研究 第四节 其它实验性操作技术 一、蛋白相互作用检测技术 一、蛋白相互作用检测技术 酵母双杂交 荧光共振能量转移技术 酵母双杂交 FRET 二、模式生物及突变体的研究 生物学研究的模式生物 脊椎动物 非洲爪蟾?(Xenopus laevis) 斑马鱼(Danio rerio) 鸡(Gallus domesticus) 小鼠/大鼠mouse(Mus musculus); rat (Rattus norvegicus) 猴子 无脊椎动物 海胆?(Strongylocentrotus purpuratus) 线虫　(Caenorhabditis elegans) 黑腹果蝇　(Drosophila melanogaster) 植物 拟南芥　(Arabidopsis thaliana) 玉米?(Zea mays) 金鱼草　Snapdragon (Antirrhinum) 水稻　rice (?Oryza sativa?) 烟草　tobacco (Nicotiana tabacum) 短柄草　slender false brome grass; (Brachypodium distachyon) 突变体制备技术 RNA水平 反义RNA RNAi DNA水平 基因敲除（knock out）： 化学诱变 P因子介导突变 同源重组的定点突变 反向遗传学与正向遗传学 致死基因与非致死基因 后基因组时代 突变体库 基因表达模式库 蛋白质组学库 非编码RNA文库 相关模式生物的数据库： PortEco SGD WormBase FlyBase MGI(Mus