猪GBP1、GBP2基因的克隆及其对PRRSV与PRV增殖的影响.pdf

猪GBPI和GBP2蛋白基因的克隆及其对PRRSV和PRV增殖的影响 目 录 摘要…………………………………………………………………………………………i Abstract……．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．……．…．．．．．．．．．．．．．．．．……………………………………………………………．iii 1文献综述…………………………………………………………………………………l 1．1抗病毒天然免疫…………………………………………………………………．1 1．2干扰素的抗病毒作用……………………………………………………………．2 1．3干扰素诱导的鸟苷酸结合蛋白家族(GBPs)简介……………………………3 1．3．1干扰素诱导的GTPase家族………………………………………………3 1．3．2干扰素诱导的鸟苷酸结合蛋白家族(GBPs)研究现状………………一4 1．4PRRSV简介………………………………………………………………………5 1．5 PRV简介…………………………………………………………………………………………………．．6 2研究目的与意义………………………………………………………………………一8 3材料与方法……………………………………………………………………………一9 3．1实验材料…………………………………………………………………………．9 3．1．1菌株、细胞、毒株、载体…………………………………………………9 3．1．2主要试剂及试剂盒………………………………………………………．．9 3．1．3其他试剂的配制方法……………………………………………………一9 3．1．4分子生物学分析软件……………………………………………………．10 3．2实验方法…………………………………………………………………………ll 3．2．1 PRRSV和PRV的增殖……………………………………………………ll 3．2．2目的基因的克隆和载体构建……………………………………………．．1l 3．2．3瞬时转染传代细胞………………………………………………………．16 3．2．4 WesternBlot检测目的蛋白在真核细胞中的表达………………………17 3．2．5 IFA检测目的蛋白的表达及细胞定位…………………………………一18 3．2．6病毒空斑实验……………………………………………………………19 3．2．7荧光定量…………………………………………………………………19 3．2．8统计学方法………………………………………………………………．2l 4结果和分析……………………………………………………………………………22 4．2猪GBPl和GBP2基因的真核表达及WesternBlot鉴定分析………………．25 5讨论与结论……………………………………………………………………………35 5．】讨论………………………………………………………………………………………………………．．35 5．2结论………………………………………………………………………………………………………．38 参考文献…………………………………………………………………………………39 致谢……………………………………………………………………………………………………………………45 鲨里里!!塑鱼呈望堡鱼苎堕塑壅堕墨!!型!坠璺∑塑!些塑堕堕墅堕 摘要 干扰素诱导的GBPs又称p65 刺激后，人的成纤维细胞可以产生一种67kDa的蛋白。GBP蛋白与Mx蛋白同属 家族在调控细胞增殖和抵抗病原体感染方面具有重要作用。目前对干扰素诱导的 GBPs家族的研究主要集中在人和小鼠上，大量实验证实了干扰素诱导的GBPs家族 具有抵抗病毒感染的作用，但具体机制尚不明晰。目前对猪源GBPs生物学功能的 研究并不多，仅有猪源GBPs可以显著抑制鼠伤寒沙门氏杆菌增殖的报道，猪源GBPs 是否有抑制病毒增殖的作用目前尚无报道。PRRSV和PRV引发的疾病给世界养