头部浅低温对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马细胞线粒体膜电位与细胞凋亡的影响.pdf

中文摘要 头部浅低温对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马细胞线粒体膜电位 及细胞凋亡的影响 摘 要 目的：阻断大鼠双侧椎动脉和双侧颈总动脉造成全脑缺血，开放血管 后造成再灌注损伤，经鼻咽腔实施冷盐水灌注来降低大脑深部温度，实现 头部的浅低温，通过检测缺血再灌损伤后大鼠海马细胞线粒体膜电位的变 C，Cyt 亡的关系，以及头部浅低温减少缺血再灌注损伤的理论基础。 方法： 1实验动物分组 3组，每组12只，标记为假手术组即S组，缺血再灌注组即I／R组，头部 浅低温缺血再灌注组即m瓜组。 2实验模型的建立以及头部浅低温的实施 基于大鼠全脑四血管供血的解剖学基础【l’3】，永久性闭塞双侧椎动脉 后，夹闭双侧颈总动脉造成全脑缺血，开放动脉夹复灌制造缺血再灌注损 伤模型，经鼻咽降温实现头部浅低温。大鼠禁食大于8小时，记录体重， 腹腔注射水合氯醛麻醉，待其对针尖刺激无反应后俯卧固定，在颅骨下触 及第一颈椎，沿中线切开分离组织直至脊椎骨，暴露椎旁两侧翼小孔，用 电烧尖烧闭双侧椎动脉，检验无出血后逐层缝合。观察24h再次麻醉大鼠， 仰卧固定，插入气管导管，持续吸入七氟醚，经鼠颈分离双侧粗大颈总动 脉，准备动脉夹。S组大鼠仅分离出双侧翼小孔和颈总动脉，不予其它处 理。FR组，HI／R组均烧灼翼小孔闭塞椎动脉，夹闭双侧颈总动脉15min， 开放灌注24小时。其中Ⅲ瓜组在气管插管后于鼻腔置入管路，灌注4C 晶体液降低脑温，待海马区温度达33。C时进行双侧颈总动脉夹闭，开放 动脉复灌1小时后停止降温，自然复温。 3实验样本提取及检测方法 3．1JC—l荧光法显微镜下观察大鼠海马细胞线粒体膜电位变化 万方数据 中文摘要 每组取大鼠4只，腹腔注射10％水合氯醛麻醉后迅速断头，取出大脑 放于冰盘上分离海马组织，标本参照线粒体提取试剂盒使用方法提取线粒 体，操作过程于低温环境下进行，标本用于线粒体膜电位的观察。 3．2Western Blot法测定Caspase．3酶原 每组取再灌注24小时大鼠4只，10％水合氯醛进行麻醉，于鼠颈根 部断头，低温下分取鼠脑海马组织，置于冷冻管密封，在液氮罐中快速超 Blot方法 低温冰冻标本，再转移到．80。C冰箱长时间保存。标本用Western 测定Caspase．3酶原表达。 C蛋白，Bcl．2及Bax蛋白表达 3．3免疫组化法观察海马CAl区Cyt 每组取大鼠4只麻醉，剪开胸廓于心尖处插入细针，以0．9％氯化钠 灌注清洗血管，再以4％多聚甲醛溶液灌流固定，待大鼠全身僵直后即刻 断头取脑分离海马组织，标本放入4％多聚甲醛溶液中继续固定，4。C保存， C蛋白，Bcl．2蛋白及Bax蛋白。 用免疫组化法观察Cyt 结果： 1大鼠海马CAl区Caspase．3酶原表达 白量减少，差异显著，有统计学意义(氏O．05)；相比于I／R组，HI／R组 Caspase．3酶原蛋白量增加，差异显著，有统计学意义(氏O．05)。 2大鼠海马CAl区C吼C蛋白表达 C蛋白表达均明显增加，有统计学 相比于S组，I／R组，HI／R组Cyt C蛋白表达明显减少，有统 差异(脚．05)；相比于I／R组，HI／R组Cyt 计学差异(火O．05)。 3大鼠海马CAl区Bcl．2、Bax蛋白表达