温度与鱼油含量对金钱鱼卵巢发育及相关基因表达的影响.pdf

温度和鱼油含量对金钱鱼卵巢发育及相关基因表达的 影响 摘要 金钱鱼 （Scatophagus argus ）味道鲜美，肉质细嫩，在我国沿海及内地经济 较发达城市以及台、港、澳、韩国、日本、泰国等地有广阔的市场，目前市场价 格达 100～200 元/公斤。迄今，金钱鱼大部分养殖种苗仍然来自野生资源，数量 有限且呈逐年减少之势，因此对其人工种苗的需求量 日益加大。 本研究以金钱鱼为研究对象，用不同温度（23 ℃、26 ℃、29 ℃）和鱼油梯度 （0、2%和 6% ）分别处理 2 龄雌性金钱鱼 6 周和 8 周，采用 RT-PCR 和 RACE 法，克隆金钱鱼叉头转录因子 （Foxl2 ）、脑型芳香化酶基因（Cyp19a1b）cDNA 全长以及卵黄蛋白原（Vtg）cDNA 片段，并应用实时荧光定量 PCR 检测了两种 处理对 Foxl2 在卵巢、Cyp19a1b 在脑垂体以及 Vtg 在肝脏和卵巢中 mRNA 表达 的影响；同时，分别应用比色法、放射免疫测定法（RIA ）以及连续组织切片技 术，检测了两种处理对卵巢发育过程中血清中蛋白磷（SPP ）、蛋白钙 (SPC) 、 性类固醇激素（雌二醇：E , 睾酮：T ）以及组织学变化的影响，为解决金钱鱼 2 人工繁育问题提供理论依据。主要结果如下： 1.温度和鱼油含量对金钱鱼卵巢组织学变化的影响 温度处理实验结束（6 周）时，23 ℃和 26 ℃组金钱鱼卵巢中出现Ⅲ时相卵母 细胞，而 29 ℃组仍和实验前一样，卵巢内充满 Ⅱ时相卵母细胞；鱼油处理实验 结束时（8 周），6%鱼油组金钱鱼卵巢中出现 Ⅳ 时相中后期卵母细胞，2%鱼油 组卵巢中Ⅲ和Ⅳ时相卵母细胞并存，而对照组卵巢中主要为Ⅲ时相卵母细胞。 2.温度和鱼油含量对血清性类固醇激素及生化指标的影响 温度对血清中 T 水平无显著影响；3 周时，23 ℃和 26 ℃组血清中 E2 水平略 高于 29 ℃组，但 6 周时两者显著大于 29 ℃组（P 0.05 ）；实验期间 23 ℃和 26 ℃ 组血清中 SPP 含量显著高于 29 ℃组（P 0.05 ），而 SPC 含量仅 23 ℃组显著高于 29 ℃组（P 0.05 ）。实验期间 2%和 6%鱼油组的 E2 逐渐升高，且在 8 周时均显 著高于对照组(P 0.05) ，而对照组 E2 无显著变化；对照组和鱼油投喂组 SPP 值 均逐渐上升，且 8 周时 6%鱼油组的 SPP 值显著高于对照组和 2%鱼油组（P 0.05 ）；各鱼油处理组 SPC 和 T 水平在实验中期（4 周）达到峰值，此后下降。 3.温度和鱼油含量对金钱鱼 Foxl2 基因表达的影响 金钱鱼 Foxl2 cDNA 全长 2024bp，其开放阅读框（ORF ）包含918bp ，编码 305 个氨基酸，包括 104 个氨基酸组成的 FH 结构域（FH-domain ），5’端非编码 I 区 （5’-UTR ）有 226bp ，3’-UTR （不包括poly （A ））有 848 bp ，推测其蛋白质 分子量为 34.365kDa 。序列分析及分子系统进化树结果表明，金钱鱼Foxl2 与其 它非哺乳类脊椎动物一样，缺少 14 个丙氨酸组成的聚丙氨酸重复区和甘氨酸- 脯氨酸重复区，其氨基酸序列与网纹石斑鱼同源性最高，为 98.4%，同源性分析 结果与根据传统形态学和生化特征分类的结果相一致。 实时荧光定量 PCR 结果显示，随处理时间的延长，23 ℃和 26 ℃组金钱鱼卵 巢中 Foxl2 mRNA 的表达量均逐渐增加，且 26 ℃组的表达量显著高于 23 ℃组 （P 0.05 ），而 29℃组表达量先略增加再回到实验前水平；鱼油处理实验显示，2% 和 6%鱼油组金钱鱼卵巢中Foxl2 mRNA 的表达量均逐渐增加，但两组间无显著 差异 （P 0.05 ），对照组金钱鱼卵巢中Foxl2 mRNA 的表达量无显著变化。 4.温度和鱼油含量对金钱鱼脑型芳香化酶 Cyp19a1b 基因表达的影响 金钱鱼 Cyp19a1b cDNA 全长 2409bp ，其开放阅读框（ORF ）包含