血管样条纹的表型分析和基因检测.pdf

3．1．2 PCR………………………………………………………………………………………………………………．31 3．1．3测序…………………………………………………………………………………．32 3．2实验结果分析……………………………………………………………………………33 3。2．1表现型分析…………………………………………………………………………。33 3．2．2遗传学分析…………………………………………………………………………．34 3．2．3不足之处……………………………………………………………………………36 3．2．4基因检测的意义……………………………………………………………………．36 3．2．5展望……………………………………………………………………………………………………………36 ，J、结……………………………………………………………………………………………………………………………。38 参考文献…………………………………………………………………………………………39 附录一英文缩写词一览表……………………………………………………………………．42 附录二血管样条纹患者信息采集表…………………………………………………………．43 综述……………………………………………………………………………………………………………………………。45 致谢………………………………………………………………………………………………52 独创性声明………………………………………………………………………………………53 中文摘要 目的：确定弹性假黄瘤(PXE)相关血管样条纹(AS)家系的突变位点，分析 表现型及遗传方式。 方法：收集2004—2014年间于北京协和医院就诊并诊断为血管样条纹的患者及家 系。l临床研究：询问病史、家族史、绘制家系图，完成眼科检查，包括视力、 屈光度、眼底彩照和自发荧光、荧光造影或ICG造影。2分子遗传学研究：对 有意愿接受检查患者及家属采集静脉血5～6ml，并收集年龄、性别相匹配的正常 人血样作为对照，提取DNA。针对致病相关基因ABCC6的31个外显子设计引 种方法摸索条件，排除假基因干扰，扩增目的片段，并进行正或反向Sanger测 序。发现DNA序列改变后，进行单核苷酸多态性(SNP)分析，除外己知正常 多态位点，并查阅遗传学数据库及文献，明确是否为已报突变。若为新发突变， 对100条染色体进行该位点扩增、测序，以排除未知多态位点可能。同时，利用 polyphen进行蛋白功能分析，预测该突变发生导致蛋白质功能损伤的可能性。3 根据临床及分子遗传学结果，对患者进行表现型及遗传方式分析。 结果：1临床资料：共收集2004．2014年间就诊于北京协和医院的2例散发确诊 患者，4例疑诊患者及苏州家系1例。2例散发患者均无明显视力异常，其中1 例31岁时因白细胞减低、反复光过敏、颈部黄色丘疹于免疫科诊为系统性红斑 狼疮(SLE)合并弹性假黄瘤，行眼底检查时发现，考虑隐性I型可能性大。另 l例14岁时因皮肤松弛，反复淤青于皮肤科诊为弹性假黄瘤，行眼底检查时发 现，考虑显性I型可能性大。苏州家系患者均于40～60岁之间出现视力异常，主 要表现为以中心为著的进行性视力下降，伴视物变形，皮肤褶皱部位过度松弛， 散发黄色丘疹，考虑显性II型可能性大，不除外隐性I型。确诊患者眼底检查可 见清晰、迂曲的黑褐色血管样条纹。2分子遗传学资料：苏州家系6人接受基因 检测，确定ABCC6基因第24号外显子发生c．3378 GC(p．E1116D)突变，致 编码氨基酸由谷氨酸变为天冬氨酸，预测造成蛋白功能损伤可能性大。该突变为 未报突变，非已知SNP位点，对100条正常对照染色体该位点测序未发现相同 改变，考虑为致病突变可能性大。3根据临床及遗传资料分析，该家系为常染色 显性遗传可能性大，杂合携带者可有一定程度外显，但不除外存在另一非PCR 方法可检测突变，以常染色隐性方式遗传可能。此外，ABCC6基因表达受包括 内的多种外因影响，表现型存在显著临床异质性。 结论：1表现型：弹性假黄瘤相关血管样条纹早期无明显症状，多于中年后逐渐 出现以中心为著的视力下降和视物变形，伴皮肤褶皱处过度松弛，黄色丘疹样改 变。眼底检查可见血管样条纹，晚期可进展至脉络膜新生血管(CNV)。2遗传 学：该疾病与ABCC6基因突变相关，多以无义和错