1-双缩脲法测定蛋白质技术方案.ppt

生物化学与分子生物学实验 实验记录 实验记录是在进行科学研究过程中积累资料、经验的一项重要工作，每一次实验过程中都应当养成良好的习惯，及时做好记录和总结。 要求： ⑴ 真实性 ⑵ 原始性 ⑶ 完整性 ⑷ 条理性 实验室规则 上实验课时不迟到，不早退，自觉遵守课堂纪律，上课时应保持实验室安静，不得大声说笑。进入实验室必须穿实验工作服。 实验课前认真预习有关课程，明确实验目的、要求和注意事项，熟悉实验内容和方法步骤。 实验时应遵守实验操作规程，按教师要求，认真操作。要细心观察实验现象，认真记录实验数据，作出结论，最后写出实验报告。 要爱护公物，小心使用仪器和实验设备，注意节约用水、电、药品和器材。 所有固体废弃物如：废纸、固体废弃物、沉淀物等必须弃于垃圾桶中。强酸、强碱必须倒入玻璃器皿中，用水稀释后倒入水槽。 试剂使用规则 使用试剂前应该仔细辨认标签，看清名称及浓度，是否为本实验所需。 取出试剂后，立即将瓶塞盖好，放回原位；未用完的试剂决不可倒回原瓶。 取标准溶液时，应该将标准溶液倒入干试管中，再用干净吸管吸取标准液，以免污染瓶中的标准液体。 使用滴管时，滴管尖端朝下，避免试剂流入橡皮帽内。 使用有毒试剂及强酸强碱时，尽可能用量筒取，若用吸管只能用吸耳球取，切勿用嘴吸取，以免造成意外。 吸量管的使用 正确拿法：中指和拇指拿住吸管上端，食指顶住吸量管顶端。 取液：用吸耳球吸取液体至刻度上，眼睛看着液面上升；吸完后用食指顶住吸量管上端。 调刻度：吸量管与地面保持垂直，下口与试剂瓶接触，并成一角度；用食指控制液体下降至最上一刻度处；液体凹面、刻度和视线应在一水平面上。 放液：吸量管移入准备接受溶液的容器中，使其出口尖端接触器壁，并成一角度，吸量管仍保持垂直。放开食指，使液体自动流出。吸量管应最后靠壁15秒。 吸量管的使用注意事项 吸量管上端标有“吹”字。将所量液体全部放出后，还需要吹出残留于管尖的溶液。此类吸量管为“吹出式”，未标“吹”字的吸量管，则不必吹出管尖的残留液体。(0.5ml以下的都要吹） 吸量管尖应接触受器内壁，但不应插入受器内的原有液体之中，以免污染吸量管及试剂。 吸取血液、尿、组织样品、粘稠试剂或有颜色的吸量管，用后应及时用自来水冲洗干净。如果吸取一般试剂的吸量管可不必马上冲洗，待实验完毕后，用自来水冲洗干净，晾干备用。 玻璃器皿的一般清洗方法 一般玻璃仪器：如试管、烧杯、锥形瓶等，先用自来水洗刷后，用洗衣粉刷洗，再用自来水反复冲洗，最后用蒸馏水淋洗2～3次。干燥备用。 容量分析仪器：吸量管、滴定管、容量瓶等，先用自来水冲洗，待晾干后，再用铬酸洗液浸泡数小时，然后用自来水充分冲洗，最后用蒸馏水淋洗2～3次，干燥备用。 比色杯：用毕立即用自来水反复冲洗。洗不净时，用盐酸或适当溶剂冲洗，再用自来水冲洗。避免用碱液或强氧化剂清洗，切忌用试管刷或粗糙布(纸)擦拭。 上述所有玻璃器材洗净(以倒置后器壁不挂水珠为干净的标准)后，根据需要晾干或烘干。 分光光度法 物质的定量分析 标准曲线法 配制一系列不同浓度的标准溶液，用选定的显色剂显色。选用合适波长的入射光。测定时先以空白溶液调节透光率100%，然后分别测定标准系列的吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标作图得到一条通过原点的直线，叫做标准曲线（或称A-C曲线）。 标准管法 对个别样品进行测定，且A-C曲线线性良好直接比较测定结果。 A标 =K标c标b标 A测 =K测 c测 b测 c测 =A测 /A标 ×c标 分光光度计的基本构造 722分光光度计使用方法 接通电源，打开仪器电源开关，打开样品室盖，预热10min; 将空白液或对照液及测定液分别装入比色杯3/4体积并用擦镜纸擦净外壁，放入样品室内, 空白液一般放于最外格，样品比色杯放入位置与试管位置对应; 调好波长; 调节按钮 开盖时，调 T 参数 调为 100 合上盖，调 A 参数 调为 0; 逐步拉出样品室拉杆（听到“咔”一声），读取吸光度值(A）; 读数完打开样品室盖，再将读数写入记录本。 双缩脲法测定蛋白质含量 实验目的 了解和掌握双缩脲测定蛋白质浓度的原理和方法。 * 实验报告的书写 实验结束后，应及时整理和总结实验结果，写出实验报告。完整的实验报告应包括：实验题目、实验目的 、实验日期、操作步骤与条件、实验结果、讨论和结论等项目。 实验室和实验台应保持整洁。公用试剂用毕，立即盖严并还原。实验完毕，仪器洗净放好。 在实验过程中必须遵守操作规程，不得随意乱动乱用。如不会使用，应请教指导教师。凡因乱动乱用违反操作规程而损坏仪器设备，造成事故者，按有关规定进行赔偿和处理。 严