沉淀分离在蛋白质处理方面的应用技术方案.pptVIP

* 沉淀分离技术在蛋白质 处理方面的应用 专业：分析化学 学号：20144015016 姓名：骆洪伟 内容 一、变性沉淀分离技术 二、絮凝分离技术 一、变形沉淀分离技术 1.基本原理及方法 原理： 利用生物大分子物质对物理、化学等外部环境因子敏感性的差异而选择性地使一种组分发生变性形成沉淀，而另一些组分保持不变，从而达到分离、除杂和提纯的目的。 变性沉淀分离的方法有: ①热变性沉淀分离 利用蛋白质热稳定性不同的特点，使蛋白质组分之间得以分离，同时使蛋白质与水及其他可溶物分离，此法常用于组织化植物蛋白的生产。 ②选择性酸碱变性沉淀分离 利用酸碱变性原理，通过调节溶液pH值，可有选择地去除杂蛋白，常用于生化制备中。 ③利用酶进行变性分离 利用酶的催化作用使一些蛋白质变性，从而沉淀分离，如凝乳酶催化牛乳酪蛋白的沉淀。 ④利用表面活性剂或有机溶剂引起变性沉淀分离 在制备核酸时，可加入含水酚、氯仿以及十二烷基磺酸钠等试剂，有选择地使蛋白质发生变性沉淀，达到去除杂质、提纯核酸的目的。 2.影响蛋白质变性的因素 ①温度 在较高温度作用下，蛋白质的二级、三级和四级结构的弱键断裂，破坏了肽链原来特有的排列和空间结构，使原来在大分子内部的极性基团转到分子表面，促进蛋白质分子相互凝集而沉淀，但温度过高又会使蛋白质发生变性。 ②pH值 大部分蛋白质在pH4～10的范围内是比较稳定的，超过这个范围强酸或强碱会使蛋白质分子内的基团带电性质发生变化，从而破坏静电引力所形成的键，使原来的构象发生变化，导致蛋白质变性。 ③其他化学因子 能使蛋白质变性的化学试剂有甲酸、乙酸等酸类，甲醇、乙醇等醇类，还有二脲、氯仿、酚等，以及表面活性剂如十二烷基磺酸钠等，它们与蛋白质高度结合，可拆散蛋白质的亚基从而使其变性。此外，酶作用也可使蛋白质变性。 1.基本原理 二、絮凝分离技术 絮凝分离主要是通过溶液中的颗粒凝集、双电层的压缩和电荷的中和作用、桥连作用、沉淀物网捕作用等机理把溶液中的微小胶体、颗粒及悬浮物除去并分离的技术。 应用实例有葎草叶蛋白的提取,其基本工 艺流程:葎草叶打浆→浸泡→压汁→离心分离 →加热沉淀→烘干 2.絮凝剂的种类 ①无机阳离子絮凝剂:三氯化铝、硫酸铝、 三氯化铁、明矾、硫酸亚铁、硫酸铁等。 ②无机阴离子絮凝剂:一氧化钙、氢氧化钙、 氢氧化钠、碳酸钠等。 ③铝盐无机高分子絮凝剂:碱式氯化铝、碱 式硫酸铝。 ④铁盐无机高分子絮凝剂:碱式氯化铁、 碱式硫酸铁。 ⑤人工合成阳离子型有机高分子絮凝剂:丙烯酰胺-丙烯酸-2-羟基丙酯基三甲基氯化铵共聚物、丙烯酰胺-甲基丙烯酸乙酯基三甲基氯化铵共聚物等。 ⑦人工合成非离子型有机高分子絮凝剂:聚乙烯醇、聚乙烯基甲基醚、聚丙烯酰胺等。 ⑧天然有机高分子絮凝剂:纤维素、三醋酸纤维素、淀粉、多糖、环糊精、果胶、树胶、蛋白质、动物胶等。 ⑥人工合成阴离子型有机高分子絮凝剂:聚丙烯酸钠、聚苯乙烯磺酸钠、丙烯酰胺-丙烯酸钠共聚物等。 3.影响絮凝作用的因素 ①pH值 一般情况下，阳离子型的絮凝剂适合在酸性和中性环境中使用；阴离子型絮凝剂适合在中性和碱性环境中使用。 ②温度 絮凝作用最适温度在20～30℃之间。水温过高，化学反应速度过快，形成絮凝体系小，且使絮凝体的水合所用增加，能量消耗大；水温过低，絮凝剂水解反应变慢，导致水解时间过长，效率降低，且温度过低时，水的黏度增大，也会增加水对絮凝体的撕裂作用，使絮凝体变得细小，不易分离。 *