8.3最终版课程.ppt

概论 类 型 测 量 仪 器 基 本 原 理 化学发光分析法 8.3.1 概论 概念： 化学发光是由化学反应提供的能量激发物质所产生的光辐射。生物发光是指产生于生物体系中的化学发光。基于这类发光现象的分析方法，称为化学发光（或生物发光）分析法。 局限性： 可供应用的发光体系尚有限，发光机理有待进一步研究，方法的选择性有待进一步提高。 优点： （1）灵敏度很高。例如应用荧光素酶和磷酸三腺苷（ATP）的化学发光反应，可测定低至2×10-17 mol·L-1的ATP，即可检出一个细菌中的ATP含量； （2）仪器设备简单，无需光源和单色器，因而也消除了散射光和杂散光的干扰； （3）线性范围宽； （4）分析速度快。 8.3.2 基本原理 在化学反应过程中，某些化合物接受能量而被激发，从激发态返回基态时，发射出一定波长的光。 A +B = C + D* D* → D + h? （1）能够发光的化合物大多为有机化合物，芳香族化合物； （2）化学发光反应多为氧化还原反应，激发能与反应能相当 ?E=170～300 kJ/mol；位于可见光区； （3）发光持续时间较长，反应持续进行； 化学发光反应存在于生物体(萤火虫、海洋发光生物)中，称生物发光(bioluminescence)。 生成激发态产物的效率 激发态产物的发光效率 化学发光效率 化学发光分析：通常是基于发光强度与被测物质的浓度成正比关系。 发光强度：单位时间内发射的光子数 由以上定义可知 ∵一般C被测 C试剂 ， ∴试剂的浓度可视为一常数，发光反应可视为准一级反应反应速率dc/dt=kc, （k为反应速率常数） 化学发光反应持续的时间随反应类型的不同而不同（0至十几分钟）。 ⑴ 对于持续时间短的发光反应，通常是测定发光信号的峰高来计算C被测； ⑵ 对于发光时间长而峰高不明显的反应，则可按下式积分，测定C被测。 S：积分面积； （t2—t1）：反应时间； c（t2）—c（t1）：被测物的浓度变化 8.3.3 化 学 发 光 的 类 型 气象化学发光 液相化学发光 臭氧的化学发光反应 氮氧化合物的化学发光反应 利用氧原子的化学发光反应 火焰化学发光 鲁米诺化学发光体系 8.3.3.1 气象化学发光 主要有O3，NO和S的化学发光反应，可用于检测空气中的O3，NO，NO2，H2S，SO2和CO等气体。 a.臭氧与罗丹明B—没食子酸的乙醇溶液产生化学发光反应，可用于测定大气中的微量臭氧。 反应式中A*为没食子酸与臭氧反应所产生的受激中间体，B为最终的氧化产物。发光的最大波长为584nm b. 氮氧化合物的化学发光反应 发射的光谱范围：600～875nm，灵敏度1ng/cm-3；测定范围为0.01~10000μg·mL-1。 其反应机理如下： 测定空气中的NO2时，可先将NO2 还原为NO，测得NO的总量后，从总量中扣除试样中NO的含量，即为NO2的含量。 c.利用氧原子的化学发光反应 气相中的SO2，NO，NO2及CO等能与氧原子产生化学发光反应，如 最大发射波长为200 nm，测定灵敏度为0.001μg·mL-1。 ① ② 发射光谱范围为300～500 nm，测定灵敏度为1ng·mL-1。 发光反应中所需要的氧原子源，一般是由O3在1000℃的石英管中分解为O和O2而获得的。 d.火焰中的化学发光反应 在富氢火焰中，也存在着很强的化学发光反应； ①一氧化氮 发射光谱范围：660～770nm； 最大发射波长：690nm； 在富氢火焰中： NO2 + 2H → NO + H2O 该反应十分迅速。 ②硫化物 挥发性硫化物SO2 、H2S 、CH3SH、 CH3SCH3等在富氢火焰中燃烧，产生很强的化学发光（蓝色）： 发射光谱范围：350～460nm； 最大发射波长：394nm； 灵敏度： 0.2 ng/cm-3； 发射光强度与硫化物浓度的平方成正比。 8.3.3.2 液相中的化学发光反应 机理研究较多，在分析中应用最多； 可测定Cl2，HOCl，OCl-，H2O2，O2和NO2。 应用最多的发光试剂：鲁米诺（3-氨基苯二甲酰肼）； 化学发光反应效率：0.01～0. 05； 鲁米诺在碱性溶液中与双氧水的反应,可检测低至10-8 mol·L-1的H2O2。过程伴随着最大发射波长为425 nm的光辐射，可用下式表示