小干扰RNA下调热休克蛋白70对A549细胞增殖和凋亡的影响.pdf

摘要 背景 肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。国际癌症研究中 (InternationalforResearchon Agency 界癌症报告》中指出，2012年全球罹患癌症的1410万人中，肺癌患者高达180 万并导致159万人死亡，给人类健康带来极大危害。热休克蛋白70(Heatshock 70，HSP70)是机体受到应激刺激后产生的一类高度保守的蛋白质，参 protein 与调控细胞内蛋白的折叠、保护细胞免受应激损伤等过程。研究发现，HSP70 N-terminal 在肺癌组织中的表达量高于正常组织。c-jun氨基末端激酶(c-jun kinase，MAPK) kinase，．INK)是促分裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activatedprotein 超家族的成员之一，应激刺激能够促使其激活并参与细胞凋亡。研究证实，诱 导产生的HSP70能够通过影响JNK的活化水平来抑制细胞凋亡。 interference 该课题利用小干扰RNA(Small 胞HSP70的表达，观察细胞的增殖活性和凋亡率的变化，检测HSP70、P．JNK 机制。 方法 1实验方法 1．1 h后，进行 RT-PCR和Real．TimePCR，筛选出沉默效果最好的siRNA。 1．2 验组。其中实验组用筛选出的沉默效果最好的siRNA转染细胞。 h、 1．2．1细胞增殖活性检测：转染12h后进行MTT实验，分别在转染后12 24h、36 h和48 h检测OD492。 1．2．2Western blot：转染48h后，收集细胞并提取蛋白，进行Westernblot One软件分析蛋白的相对表达量。 实验，以[3-actin作为内参，用Quantity T 摘要 1．2．3细胞凋亡率的检测：转染48h后，将细胞消化下来制成单细胞悬液， 用Annexin．V-FITC和PI处理细胞，用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。 2统计方法：采用SPSS21．0对数据进行统计学分析，均数的比较采用单 因素方差分析，两两比较采用LSD法或Dunnett法。检验水准a=0．05。 结果 1 siRNA对HSPAlA mRNA 的抑制效果最好。 2HSP70表达下调对A549细胞增殖活性的影响：与Mock组相比，转染后 24h、36 h和48h，HSPAlA．2009组细胞增殖活性均下降(均P0．05)。 3Western HSPAl NC组活化型Caspase．3表达量高于Mock组(尸O．05)。 4 率高于NC组和Mock组(均P0．05)。 结论 siRNA．HSPAlA．2009能够有效抑制A549细胞HSPAl．4mRNA的表达； siRNA下调HSP70能够抑制A549细胞的增殖，并促进细胞凋亡，且该过程伴 随着JNK和Caspase一3活化水平的降低。 关键词肺癌小干扰RNAA549细胞热休克蛋白70·细胞凋亡 II Backgroud cancer the and inall isdisease诚tll Lung hi．曲estmorbiditymortalitymalignarrt