蛋白质的电化学化学技术方案.doc

蛋白质的电分析化学研究 王惠凯 摘要：生命现象的许多过程皆伴随着电子传递反应，应用电化学方法研究生物体系的电子传递及其相关过程是揭示生命本质的较好途径。本文从酶生物传感器、蛋白质修饰电极和免疫传感器3 个方面评述了近年来蛋白质的电分析化学研究的现状和进展，并提出了今后可能的研究方向。 关键词：生物传感器；酶生物传感器；免疫传感器；蛋白质；电分析化学 中图分类号：0657.l 文献标识码：A 文章编号：l000-0720（2006）0l-0ll4-09 蛋白质属于生物有机大分子，是决定生命存在和运动的最重要的一类物质。从极其复杂的具有多细胞和组织、器官分化的高等动、植物，到简单的单细胞原核生物甚至无细胞的分子生命形式病毒，一切生命体的繁衍、代谢、生存、发展都离不开蛋白质，蛋白质在构成有机体和完成体内精确的生化代谢和机体多样的生理功能中发挥着重要作用。从整个生态系统来看，蛋白质的代谢和利用是维持物种关系和生态平衡的重要因素。对于整个自然界来说，蛋白质作为一种主要的有机氮存在方式，它在物质循环中起着重要作用，它的出现和演变对生命的起源和物种的形成、进化具有重要的意义。对于人类来说，蛋白质作为基本营养成份是人类生存所需的基本物质，所以对蛋白质的研究、开发和利用都是非常重要的课题。 用电化学手段研究蛋白质和酶的电子传递过程，引起国内外化学家和生物化学家的广泛关注，因为氧化还原和电极之间的电子传递过程更接近生物氧化还原系统的原始模型［l］。l . 电化学和氧化还原的电子传递过程或氧化还原反应均包含异相的电子传递过程；电化学过程发生在电极-溶液界面，而生物氧化还原过程则发生在蛋白质（酶）-体液之间；2 . 电化学反应能模拟生物氧化还原反应的条件（即形成仿生界面）：如可将pH、离子强度、温度、反应进行的非水环境等调节至生理状态；3 . 进行电子传递之前，蛋白质的亚基分子以特殊构象定位于电极表面，而在生物体内定位于酶的活性位点。实现生物大分子与电极之间电子转移必须将生物大分子的电化学活性中心与电极距离缩短到l nm［2］，或使生物的分子与电极表面活性基团键合，以形成电子传输通道［3］。多年来科学工作者不断地探索各种途径，探讨蛋白质快速电子传递反应过程，以实现体内蛋白质生理反应过程的电化学模拟，为揭示生物氧化还原系统中电子转移机理奠定基础。要实现这一目标关键是提高氧化还原蛋白质和酶与电极之间电子传递的速度和可逆程度。本文将对酶生物传感器、蛋白质修饰电极和免疫传感器的电化学研究现状和进展及相关技术进行评述。 l、酶生物传感器 酶作为一类典型的生物大分子和特殊的催化剂，在生命过程中扮演着极其重要的角色。尤其是在呼吸链中生物氧化和新陈代谢是靠多种酶的共同作用才完成的，研究酶的直接电化学无论在理论上还是在实用上都具有重要意义。在理论上，酶与电极之间直接电子传递过程更接近生物氧化还原系统的原始模型，这就为揭示生物氧化还原过程的机理奠定了基础。另外，酶的直接电化学的研究可望为推断生物氧化还原系统中电子传递反应的特异性提供一定的依据。 l .l 酶生物传感器的基本结构及工作原理 酶生物传感器是由一个固定化的生物敏感膜和与之密切结合的换能系统组成，它把固定酶和电化学传感器结合在一起，因而具有独特的优点［4］：（l）它既有不溶性酶体系的优点，又具有电化学电极的高灵敏度；（2）由于酶的专属反应性，使其具有高的选择性，能够直接在复杂试样中进行测定。因此，酶电极在生物传感器领域中占有重要地位。 当酶电极浸入被测溶液，待测底物浸入酶层内部并参与反应。大部分酶的反应都会产生或消耗一种可被电极测定的物质，当反应达到稳态时，电活性物质的浓度可以通过电位或电流模式进行测定。因此，酶生物传感器可分为电位型和电流型两类传感器。电位型传感器是指酶电极与参比电极间输出的电位信号，它与被测物质之间服从能斯特关系。而电流型传感器是以酶促反应所引起的物质量的变化转变成电流信号输出，输出电流大小直接与底物浓度有关。电流型传感器与电位型相比具有更简单、直观的效果，且灵敏度也较高。 l .2 酶生物传感器的发展阶段 酶电催化研究经历了3 个发展阶段即以氧为中继体的电催化，基于人造媒介体的电催化和直接电催化，以葡萄糖氧化酶（GOD）催化葡萄糖（giucOse）为例可说明如下：以氧为中继体的电催化（第一代生物传感器） 溶液： GODOX + giucOse!giucOnOiactOne + GODred（l） GODred + O2!GODOX + H2O2（2） 电极：H2O2!O2 + 2H+ + 2e （3） 基于人造中继体的电催化（第二代生物传感器） 溶液： GODOX + giucOse!gi