乳酸杆菌对ApoE小鼠动脉粥样硬化形成的影响和机制研究.pdf

乳酸杆菌对ApoE乒小鼠动脉粥样硬化形成的影响及机制研究 摘要： 研究背景：心血管疾病是世界范围内致病率和致死率主要的原 因，动脉粥样硬化是心血管病的病理基础。降脂治疗是防治心血管 疾病的一种常规手段，常用的降脂药由于是化学合成的药物，各有 其副作用和不良反应，临床上迫切需要疗效更好更安全的降胆固醇 药。乳酸杆菌从公元3世纪起即被人们用于发酵食物，悠久的使用 历史证明了乳酸杆菌是一种安全的益生菌并具有多种功效。从20世 纪六七十年代起人们开始关注乳酸杆菌的降胆固醇作用并迅速成为 益生菌研究领域的热点。然而，乳酸杆菌降胆固醇的效果一直存在 争议，有关乳酸杆菌对心血管疾病作用的研究非常有限，而直接研 究乳酸杆菌对动脉粥样硬化形成影响的报道更加少。目的：研究嗜 酸乳酸杆菌ATCC 4356对ApoE4小鼠血清胆固醇和动脉粥样硬化 形成的影响并从乳酸杆菌对炎症、氧化应激和肠道菌群的调节三方 面阐明可能的机制。方法：(1)实验对象分组和饲养：野生型 小鼠为动脉粥样硬化动物模型，ApoE。小鼠灌胃生理盐水作为动脉 乳酸杆菌ATCC 胃5×108CFU嗜酸乳酸杆菌ATCC4356组作为菌液高剂量组(La．H 组)。小鼠均为8周龄的雄性小鼠，每天灌胃体积为0．5mL，连续12 TT 周。WT组小鼠饲料为普通饲料，ApoE斗小鼠用高脂高胆固醇饲料 (含15％猪油+O．25％胆固醇)喂养以加速动脉粥样硬化模型的形成。 (2)实验过程中，定期记录小鼠体重并观察体重变化，实验结束后 将小鼠麻醉处死、取材、保存。(3)检测乳酸杆菌对血清胆固醇的 影响：利用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(totalcholesterol， density lipoproteincholesterol，HDL．C)和低密度脂蛋白胆固醇(10wdensity lipoprotein 化形成情况：对小鼠主动脉大体和主动脉根部冰冻切片行油红O染 色，对动脉粥样斑块面积进行定量；对主动脉根部切片进行HE 染色观察粥样斑块的病理变化。(5)检测氧化应激分子的变化：用 immunosorbent 酶联免疫吸附试验(enzyme．1inked low 测各组小鼠血清中氧化型低密度脂蛋白(oxidized density 检测炎症因子的变化：采用ELISA方法检测小鼠血清肿瘤坏死因子 一0【(Tumornecrosisfactor 10， chainreaction。real—timePCR)检测各组小鼠主动脉的 polymerase factor blot B，NF．KBP65)信号通路的激活情况：用western kappa 检测总蛋白核因子KB抑制蛋白d蛋白(nuclear inhibitor P65的蛋白表 alpha，Ir．B—a)、胞浆蛋白和胞核蛋白NF．1(B 达水平。(8)检N4,鼠肠道菌群的变化：对小鼠粪便进行倍比稀释 后，利用选择性培养基，Mac用于大肠杆菌、EC用于肠球菌、MRS 用于乳酸杆菌和BS用于双岐杆菌的分离培养并进行菌落的鉴定和 计数。用MTT方法检测嗜酸乳酸杆菌ATCC4356对肠上皮细胞 Caco．2细胞增殖的影响。 结果：(1)成功构建动脉粥样硬化小鼠 模型。(2)小鼠体重的变化：高脂高胆固醇喂养的ApoE小小鼠体重 增加要大于普通饮食喂养的野生型C57BL／6J小鼠，但是嗜酸乳酸杆 菌ATCC4356对小鼠体重没有影响。(3)乳酸杆菌对胆固醇的影响： 乳酸杆菌对Ap