DZNep对食管鳞癌细胞增殖、凋亡与迁移的影响.pdf

摘要 DZNep对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响 硕士研究生 王瑞莉 导 师 网关方霞 郑州大学生物工程系 郑州 450001 摘要 3．deazan印lanocinA(DzNep)是一种组蛋白甲基化酶抑制剂，且已被应用 于抗肿瘤、抗寄生虫、抗病毒、抗关节炎以及免疫抑制活性等药理作用【l。3J。据 报道，DZN印可使肿瘤中沉默的抑癌基因再活化，从而抑制肿瘤细胞的扩散， 为治疗肿瘤提供了一个新型的靶点。另外，研究表明DzNep对于治疗肝癌、乳 腺癌、髓母细胞瘤、急性髓系白血病、多形性胶质母细胞瘤、非小细胞肺癌、 心脑血管疾病以及艾滋病等均能起到重要作用【4母】。然而关于DZNep对食管鳞 癌的作用报道甚少，因此本论文将对DZNep在食管鳞癌发生发展中的作用进行 初步研究。 食管鳞癌是我国较常见的消化道恶性肿瘤，其病发率和病死率位居全国恶 性肿瘤第四位。一般情况下患者确诊时已为中期或者晚期，且容易复发，预后 较差【Io’ll】。传统的食管鳞癌治疗方法主要包括外科手术治疗、化疗以及放疗， 然而患者的治愈率以及预后情况并不乐观。由于诱发肿瘤的相关基因的变化是 经过多阶段积累而成，因而在食管鳞癌癌变的不同阶段均涉及到多个癌基因的 激活以及抑癌基因的失活。因此，寻找治疗食管鳞癌的分子靶向药物，联合其 他治疗手段从而综合治疗食管鳞癌已迫在眉睫。 S．腺苷高半胱氨酸水解酶(S．adenosylhomocysteine 甲基化通路中的重要限速酶，可催化体内细胞S．腺苷高半胱氨酸(S． 是一种可逆反应。腺苷在一系列酶的催化下可生成cAMP，后者作为细胞内的 第二信使，可参与细胞信号转导【12】。同时，高半胱氨酸通过一系列催化反应， 提供甲基，在甲基转移酶的催化下生成S．腺苷高半胱氨酸，从而完成整个甲基 摘要 化循环。可见，SAHH是生物体内转甲基反应的重要调控者，调控多种受体分 子，例如蛋白、核酸以及一些信号转导分子等的甲基化反应【13】。EZH2是PRC2 家族中的组蛋白甲基转移酶，主要介导肿瘤细胞的组蛋白去甲基化，在多种肿 饰而诱导基因沉默[14】，且在调节转录调控和染色质状态方面也起到一定作用。 已有证据表明，DZN印具有抗肿瘤活性，部分源于通过降低EzH2基因的表达 和催化活性从而导致PRC2受到抑制。 细胞，并检测DZN印处理后细胞的细胞周期、增殖、迁移、凋以及粘附能力的 变化，进而探讨DzNep对食管鳞癌细胞的影响。本研究主要分为两部分，第一 部分对DzN印处理食管鳞癌细胞的条件进行探索和优化，第二部分检测 DZN印处理食管鳞癌细胞后细胞周期、增殖、迁移、凋亡以及粘附能力的变 化。 方法 1细胞培养 食管鳞癌细胞EC9706、Ecal09均为本实验室保存。两株细胞均在含有 胞培养箱中培养。 2DZNep处理食管鳞癌细胞条件的优化 通过不同浓度的DzNep处理Ecal09细胞，且处理不同时间后提取细胞总 sAHH、EzH2蛋白以及SAHHmRNA水平的表达，从而确定DZN印处理食管 鳞癌细胞的最优条件。 3DZNep对食管鳞癌细胞周期、增殖、迁移、凋亡及粘附因 子影响的检测 II 摘要 DZN印按照最优条件处理食管鳞癌细胞后，通过流式细胞术检测DzN印 DzN印对细胞迁移能力的影响，westemBlot方法检测DzNep对细胞粘附因子 的影响。 结果 1 DZNep处理食管鳞癌细胞条件优化及其相关蛋白表达情况 westem 胞形态已发生变化且出现死亡细胞，因此我们选择其最适浓度为5岫ol／L，最 佳处理时间为48h。通过Westem 显示SAHH无论在蛋白水平还是mRNA水平均无明显变化(胗0．05)。此外， westem (P0．05)。 2DZNep对食管鳞癌细胞周期、增殖、迁移、凋亡及粘附因 子影响的检测 胞周期的变化，发现处理后的EC9706细胞周期无明显变化(胗0．05)，而 理组迁移至下室的细胞数明显少于对照组(火O．05)。