大肠杆菌的培养和分离剖析.ppt

大肠杆菌的培养与分离 一、大肠杆菌（E. coli） 培养基（culture media） 按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。 提供微生物生长的条件： 合适的温度：25-37℃ 合适的pH：细菌 6.5-7.5 中性偏碱 真菌 5.0-6.0 中性偏酸 营养成分：含有碳源、氮源、生长因子、水和无机盐。 细菌喜荤，霉菌喜素 LB培养基的配方 琼脂？ 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的重要依据。 1)消毒： 概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。 方法: 煮沸消毒法 化学药剂消毒:酒精 紫外线消毒 高压蒸汽灭菌法 高压蒸汽灭菌法为湿热灭菌法，其优点有三： 1、湿热灭菌时菌体蛋白容易变性； 2、湿热穿透力强； 3、水蒸汽变成水时可放出大量热增强杀菌效果，因此，它是效果最好的灭菌方法。 平板划线分离法 进行恒温培养时，为什么要将平板倒置？ 课后思考题 答：恒温培养时，培养基的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿会是水蒸气凝结成水滴留在盖上；如果正放培养皿，则水分形成的水滴回落到培养基的表面并且散开。如果培养皿已形成菌落，则菌落中的菌会随水扩散，菌落相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。因此，恒温培养时，培养皿必须倒置。 划线分离法注意事项: 1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次. 2.划线首尾不能相接 3.划线后,培养皿倒置培养12~24h 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 * * * * 兼性厌氧的肠道内的共生菌群 合成维生素B和维生素K，供机体利用；产生大肠杆菌素，抑制肠道致病菌和腐生菌滋生。 革兰氏阴性菌 作为一种工程菌， 在基因工程技术中被广泛采用。 例：大规模生产治疗糖尿病的药物——胰岛素 细菌的革兰氏染色 革兰氏染色法是一种用于细菌的染色法。此法将细菌分为两类，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓革兰氏阳性菌就是用革兰氏染液染色后，再用脱色液处理，细菌仍保留染色液的颜色；革兰氏阴性菌则相反。这两种菌的差别在于细胞壁的成分不同。 大肠杆菌属于革兰氏阴性菌 加至50ml H2O 0.5g NaCl 0.25g 酵母提取物 0.5g 蛋白胨 各成分的量 培养基成分 固体培养基的配制：每50ml 液体培养基添加1g 琼脂 红藻中提取的多糖,在98 ℃以上熔化，44 ℃以下凝固，常温下凝结成有弹性的凝胶。 凝固剂 固体培养基：菌落 ☆ 菌落 液体培养基： 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 无菌操作 （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 ； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。 　（1）消毒： 　　利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。 消毒与灭菌 　　（2）灭菌： 灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。 以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌的过程。 （2）灭菌 概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物。 方法：a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌d过滤灭菌（G6玻璃砂漏斗） 灼烧灭菌 微生物的接种工具 (接种环、接种针)或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧 注意适用范围 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h 高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15min 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 1 二、大肠杆菌的培养和分离