5核酸1217研讨.ppt

复习巩固 核酸的种类和分布 核酸的组成成分 核酸的一级结构 DNA双螺旋结构的要点 稳定DNA双螺旋结构的化学键 蛋白质α-螺旋和DNA双螺旋结构中氢键的特点 RNA的一级结构 tRNA二级结构 五、核酸的性质 （一）一般的理化性质 DNA为白色石棉样的纤维状物 核酸和核苷酸大都呈酸味（除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外），两性解离 / 一般呈酸性（在中性溶液中带负电荷） 溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。DNA钠盐在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。RNA钠盐在水中可达40g/L。 酸性溶液中DNA、RNA易水解，中性或弱碱性溶液中较稳定，DNA在碱中变性，但不水解，RNA水解。 DNA溶液的粘度很大，抗剪切力差，而RNA溶液的粘度小得多。核酸发生变性或降解后其粘度降低。 加热条件下， D－核糖＋浓盐酸＋苔黑酚 绿色 D－2－脱氧核糖＋酸＋二苯胺 蓝紫色 （二）核酸的紫外吸收特性 在核酸分子中，由于嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键体系，因而具有独特的紫外线吸收光谱，一般在260nm左右有最大吸收峰，可以作为核酸及其组份定性和定量测定的依据。 以A260/A280进行定性、定量 DNA和RNA溶液中加入溴化乙锭（EB），在紫外下发出荧光 思考题 通常DNA纯制品的A260／A280为1.6~1.8。提取DNA时，RNA污染会导致A260／A280过高，而蛋白质或者酚类物质的污染会导致A260／A280过低，请解释其中的原因。 （三） 核酸的变性和复性与分子杂交 1. 变性 稳定核酸双螺旋的次级键断裂，空间结构破坏，变成单链结构。核酸的的一级结构(碱基顺序)保持不变。 变性表征：生物活性部分或全部丧失、粘度下降、浮力密度升高、紫外吸收（260nm）增加（增色效应） 变性因素 pH（11.3或5.0）：变性剂（脲、甲酰胺、甲醛），低离子强度，加热 不同来源的单链核酸（DNA或RNA），具有大致相同的碱基序列，经过退火处理，可能重新形成杂种双螺旋。molecular hybridization。 利用这一原理，就可以使用已知序列的单链核酸片段作为探针，去查找各种不同来源的基因组DNA分子中的同源基因或同源序列。 1、DNA提取的意义：研制核酸类药物及保健品；基因诱变；DNA克隆、测序；PCR扩增 (1)抗病毒剂，三氮唑核苷、无环鸟苷和6可糖腺苷等，用于抗肝炎病毒、疱疹病毒及其他病毒； (2)抗肿瘤剂，治疗消化道癌的氟尿嘧啶以及各类白血病的阿糖胞苷等； (3)干扰素诱导剂，聚肌胞，临床上用于抗肝炎病毒、疱疹病毒等； (4)免疫增强剂，主要用于抗病毒及抗肿瘤的辅助治疗； (5)供能剂，肝炎、心脏病等多种疾病的辅助治疗。药用腺苷三磷酸(ATP)原粉可从酵母RNA为原料制备，也可通过人工合成及发酵生产。 3、核酸的存在形式： 包括DNA、RNA，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在； 真核生物的染色体DNA为双链线性分子； 原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器DNA为双链环状分子； 有些噬菌体DNA有时为单链环状分子； 病毒的DNA、RNA分子，其存在形式多种多样，有双链环状、单链环状、双链线状及单链线状等。 从不同材料中提取DNA的方法及分离的难易程度不同。从高等动植物及细菌中提取DNA难度大一些。由于其DNA分子量较大。因此易被机械张力剪断。细菌DNA，除核DNA 外，还有质粒DNA 等。 核酸包括DNA、RNA，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在，用DNP和RNP 表示，在盐溶液中溶解度受盐浓度的影响而不同。 DNP在低浓度盐溶液中，几乎不溶解，如在0.14 mol/L的氯化钠溶解度最低，仅为在水中溶解度的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至1mol/L氯化钠中的溶解度很大，比纯水高2倍。而RNP的溶解性几乎不受盐浓度的影响。 从不同材料中提取DNA的方法不同，分离提取的难易程度也不同。 高等动植物及细菌的DNA 分子量较大，易被机械张力剪断，所以提取DNA难度大一些。 质粒DNA及低等生物如从病毒由于DNA分子量较小，提取DNA比较容易，易保持其结构完整性。 核酸在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在，用DNP和RNP 表示； DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。 DNP在低浓度盐溶液中，几乎不溶解，如在0.14 mol/L的氯化钠溶解度最低，仅为在水中溶解度的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至1mol/L氯化钠中的溶解度很大，比纯水高2倍。而RNP的溶解性几乎不受盐浓度的影响，因此，在提取时，常用此法分离这两种核蛋白。 根据生物材料、待提取核酸分子的特点及研究需要确定提取方案 细胞的破碎：①机械方法：超声波处理法