第章光光度法介绍.pptVIP

8 吸光光度分析法;8.1 吸光光度法(光谱分析法) 它是基于物质对光的选择性吸收的特征和对光的吸收程度而对物质进行的定性和定量分析的一种分析方法。;吸光光度法;　许多物质具有颜色，还有些物质能形成颜色[例如] 　MnO4- 紫红　Cr2O72-橙黄　FeSCN2+血红　　　　　而且有色物质溶液颜色的深浅与浓度有关 ,浓度越大颜色越深.;8.2 吸光光度法的基本原理;单色光：具有同一波长的光;;;8.2.2 溶液的颜色和光的吸收关系: 颜色是物质对不同波长光的选择性吸收的结果.;8.2.3 光吸收曲线(吸收光谱);KMnO4溶液的光吸收曲线;0;吸收光谱反应了不同物质的不同特征吸收： ;　(4)若选择在λmax处测量A，则灵敏度高 　(5)从吸收光谱曲线得出结论：c愈大，颜色愈深，吸收光愈强；c愈小，则相反 ;8.3 光吸收基本定律-----朗伯-比尔定律;I0;透光度 （transmittance);;　　吸光度A的加和性 ;8.3.2 吸光系数及摩尔吸光系数;摩尔吸光系数ε: 是指在一定波长时，溶液浓度为1mol·L-1，厚度为1cm的吸光度。 单位: L·mol-1·cm-1;　　影响ε值大小的因素： ;　　桑德尔灵敏度S ：当仪器所能检测的最低吸光度A=0.001时，单位截面积光程内所能检测出来的吸光物质的最低量（μg?cm-2）;　　[例如]已知含Fe2+12.5μg/25mL，用邻二氮非显色后形成Fe(Phen)3 用2cm比色皿在λ508nm测得A=0.19 ，求ε=？ ;例8.1 纯化后的胡萝卜素（C40H56，其摩尔质量为 536g?mol-1），用氯仿配成浓度为 2.50mg?L-1的溶液，在 λmax =465nm，吸收池厚度为1.0cm ，测得吸光度为0.550，试计算胡萝卜素的吸光系数a、摩尔吸光系数?和桑德尔灵敏度S。;例12-1 已知某化合物的相对分子质量为251，将此化合物用乙醇作溶剂配成浓度为0.150mmol·L-1的溶液，在480nm波长处用2.00cm吸收池测得透光率为39.8％，求此化合物在上述条件下的摩尔吸光系数ε和吸光系数a。;解：;　　8.3.3 偏离Beer Laws的因素 ;　(3)介质不均匀引起的偏离;　（2）化学因素引起的偏离 ;　　(4) 非单色光引起的偏离 ;8.4 吸光光度分析法及仪器;　　8.4.2 吸光光度法：;(2)测定方法：;图12-6 维生素B12的标准曲线;（2）比较法;　　8.4.3 分光光度计 ; 1、光源(light source) ;白光;;72系列分光???度计结构;;8.5 显色反应及显色条件选择;显色剂：能与被测物质反应生成稳 定的有色物质的试剂。;　　8.5.2 影响显色反应的主要因素 ;　　(1) 溶液的酸度 ;影响络合物的组成 ;（2）显色剂的用量: 为保证反应完全，R过量，且不宜过多(适宜用量通过实验确定);（3） 时间和温度 通过实验确定;8.6 吸光光度法测量误差及测量条件的选择;仪器测定误差:;;20;适宜测量范围：A在0.15～0.8之间 T在15％～70％之间 当A=0.434 (T=36.8%)时，测量误差最小;8.6.2 测量条件的选择;(2)选择适当的参比溶液：调节仪器零点，它可消除由于吸收池壁及溶剂、试剂对入射光的反射和吸收带来的误差。;当试液中有其他组分在测定波长处有吸收，而所用试剂和显色剂无色时，应采用不加显色剂的试液作参比溶液，称为样品空白。 当显色剂和试液在测定波长处都有吸收，或显色剂与试液中共存组分的反应产物有吸收，可在一份试液中先加入适当的试剂将被测组分掩蔽起来，再按相同的操作方法加入显色剂和其他试剂，以此作为参比溶液进行测定。;