荧光显微镜的基本原理及应用答案.ppt

高分辨率荧光显微镜的基本原理和操作要求;;一、荧光显微镜(fluorescence microscope) 原理： 某些物质经一定波长的光（如紫外光）照射后，物质中的分子被激活，吸收能量后跃迁至激发态；当其从激发态返回到基态时，所吸收的能量除部分转化为热量或用于光化学反应外，其余较大部分则以光能形式辐射出来，由于能量没能全以光的形式辐射出来，故所辐射出的光的波长比激发光的要长，这种波长长于激发光的可见光部就是荧光(fluorescence)。所谓荧光就是某些物质在一定波长光（如紫外光）的照射下、在极短时间内所发出的比照射光波长更长的可见光。;;;二、荧光显微镜的组成 1、光源：一般采用高压汞灯 2、滤色系统：由激发滤板和压制滤板组成 a、激发滤板：提供一定范围的激发光 b、压制滤板：完全阻挡激发光通过，提供相应滤长范围荧光 3、反光镜：一般采用平面反光?? 4、聚光镜：用石英玻璃或其他透紫外光的玻璃制成 5、物镜和目镜 ;The optical system of a fluorescence microscope. A filter set consists of two barrier filters (1 and 3) and a dichroic mirror (beam-splitting 2);;三、荧光显微镜的操作;;四、荧光显微镜标本制作要求;;五、荧光染料的使用;六、荧光组化实验中应注意的几个问题;七、荧光显微镜应用技术;;;;八、使用注意事项 1 暗室内进行，打开汞灯5-10min稳定后再观察。 2 荧光淬灭(光漂白)：激发光长时间照射会发生荧光减弱或消失，操作时注意及时用挡板阻挡激发光照射标本。 3 汞灯关闭后需冷却30min后再重新启动（最好不要短时间内反复开关，标本应集中观察。） 4 载物台前方黄色遮光板：最好不直接用肉眼看激发光，以防短波光中的紫外伤害。 5标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。;The end,thank you!