eha基因对迟缓爱德华菌和其在巨噬细胞内存活的影响.pdfVIP

万方数据 幽??蚨猿倩喊?禄?捌湓诰奘上赴?诖婊畹挠跋?中文摘要????虺艵?是一种重要的人兽共患病原菌，能够在巨噬细胞内生存和繁殖，是其致病的关键。?溶血调控基因?????????，简称??是一个重要的转录调控基因，能够调控?的某些毒力因子。已有研究表明，???蚩赡苡??的胞内生存有关，但是该基因如何影响该菌的胞内生存机制及其毒力尚未阐明。???蚅?细胞毒性检测结果均表明，野生株的细胞毒性明显高于??笔е辏?诘?镜和倒置光学显微镜下也观察到这一现象。??笔е暝赟?和多粘菌素?财然肪持械拇?活率明显降低，表明???虻娜笔Э赡苡跋霦??逑喙爻煞值暮铣伞????峁?砻鳎??生株中外膜蛋白基因??的转录水平高于??笔е辏籷???结果显示??笔е阣?的转录水平为野生株的???丁??．??电泳也显示，野生株的三种外膜蛋白表达水平高于??笔е辏?渲???饽さ鞍资怯盏继逡汉拖赴?庖弑；た固宓闹匾?乖?Ｒ虼耍琫?基因通过影响?菌体相关成分的合成，影响?菌在胁迫环境中的存活率。流式凋亡检测和电镜观察结果显示，??笔е旮腥鞠赴?榈南赴?蛲雎矢哂谝吧?旮腥鞠赴?椋?崾緀?基因可抑制?引起巨噬细胞凋亡的作用。???结果显示，???蛏系鱁?孝笮头置谙低撤?泌蛋白?捅廾ǖ鞍證的表达，而Ⅲ型分泌系统可抑制宿主细胞的凋亡。但是???蚴欠?通过调控?蛐头置谙低车谋泶锒?跋霦?跃奘上赴?牡蛲鲎饔茫?褂写?教帧?通过?感染???．?赴???浼剖?ú舛ㄆ浒?诖婊罴暗缇怠⒐饩倒鄄旖峁?砻鳎?野生株和??笔е昃?稍诰奘上赴?诖婊詈头敝常?ê鸵吧?晗啾龋琫?缺失株在巨噬细胞内的繁殖速率明显下降。模拟巨噬细胞内强氧化环境的应激实验结果表明，相比野生株，??缺失株对过氧化氢的敏感性显著提高，在过氧化氢中的存活率明显降低。流式检测细菌感染后巨噬细胞产生活性氧的水平，结果显示，??笔е旮腥鞠赴???．?％?哂谝吧?曜??????。进一步用???和????笛榻峁?砻鳎琫?基因的缺失下调了?中过氧化氢酶和超氧化物歧化酶的转录水平；??笔е曛衧??脱ǖ频淖B妓?椒直鹞R吧?甑?．?其分解巨噬细胞中活性氧的能力和在不同浓度过氧化氢中的存活率。模拟巨噬细胞吞噬溶酶体中酸性环境的应激实验结果表明，???的酸处理细菌?后，??缺失株的存活率明显低于野生株。用???抑制剂洛霉素?抑制巨噬细胞的酸化，野生株迟缓爱德华菌???????倍和???丁Ｕ馓崾緀?基因通过调控?中过氧化氢酶和超氧化物歧化酶的表达，从而影响和??笔е甑陌?诖婊钅芰??邢灾??撸???叱潭扔忻飨圆钜臁Ｍü?ü庀晕⒕倒鄄爝???????? 万方数据 啶橙??染色的细胞颜色，结果显示，野生株和??笔е攴直鸶腥揪奘上赴??鹣赴??化的程度有差异，说明???蛟诘骺谽?钟?奘上赴?峄?衅鹆酥匾W饔谩＝?徊接肦???和??甈?实验结果显示，相比野生株，??笔е曛孝笮头置谙低车姆置诘鞍缀凸劝彼嵬?羧酶的转录水平明显降低；??笔е曛衑??蚲??淖B妓?椒直鹞R吧?甑腛．?倍和???丁Ｕ馓崾緀?基因可能通过调控?中Ⅱ?头置谙低澈凸劝彼嵬阳让傅谋泶铮?诘钟??进一步比较野生株和??笔е暝谛∈蟾卧唷⑵⒃嗪蜕鲈嘀邢妇鶦?／???牟钜欤?⑾???笔е甑腃?／???灾?陀谝吧?辏?砻鱡?缺失株在宿主体内的生存能力明显降低。比较分析??笔е旰鸵吧?甓孕∈驦??牟钜欤?峁?允荆琫?缺失株相比野生株毒力下降了??倍。为比较这两个菌株对宿主损伤的差异，对分别感染这两个菌株的小鼠肝脏、脾脏和肾脏的病理变化进行了分析。结果显示，小鼠感染野生株?后，出现肝细胞水肿和中性粒细胞浸润，脾小体内细胞坏死，肾小管水肿等病变，提示野生株对小鼠的肝脏、脾脏和肾脏有一定的毒性作用，而??笔е甓陨鲜鲈嗥魑廾飨远拘宰饔谩Ｕ馑得鱡?基因缺失后，?的毒力明显减弱，对宿主的病理损伤减轻。可见???蛴跋霦?诰奘上赴?诤退拗魈迥诘拇婊罴?其毒力。以上研究结果表明，???蚰芄煌ü?系鱁?承┒玖σ蜃拥谋泶铮?绻?趸?饷浮⒊??化物歧化酶、Ⅲ型分泌系统、谷氨酸脱羧酶和外膜蛋白等，来抵御巨噬细胞内活性氧、酸和抗菌肽等的杀??菌作用，并抑制细胞的凋亡功能，有利于?在巨噬细胞内和小鼠体内的存活和对其调控?胞内生存的分子机制有了一个初步的了解，为深入研究该菌复杂的致病机制和网络调控系统提供了重要线索。关键词：迟缓爱德华菌；噬细胞酸化中起了重要作用。繁殖，增强细菌的毒力。通过本课题的研究，明确了???蚴且桓鲋匾5亩玖ψB嫉骺鼗?颍????颍痪奘上赴?换钚匝酰凰峄?虎笮头置谙低?东南大学硕士学位论文 万方数据 慨??????鑙??????????????????’????????．??????．?????琫??．?????．????駆??