EMSA操作说明概述.docVIP

非放射性凝胶迁移试剂盒（EMSA）操作手册 本说明书适用于产品号为SIDET001, SIDET003与SIDET004的产品 目录号产品名称包装SIDET001非放射性 NF-KB EMSA36 次结合反应SIDET003非放射性 STAT3 EMSA36 次结合反应SIDET004非放射性 STAT5 EMSA36 次结合反应 VER. 3.11 2005年2月  目 录 1. 简介 3 2. 试剂盒包装清单 3 3. 自备实验材料与仪器 4 4. DNA/蛋白质结合反应 4 5. 聚丙稀酰胺凝胶电泳 5 6. 电转移 6 7. DNA的交联固定 6 8. 化学发光反应 6 9. 化学发光图像显示 7 10．常见问题 8 11. 参考文献 8 12．注意事项 9 2005? Viagene，All rights reserved. 1．简介 EMSA ( Electrophoretic Mobility Shift Assay ) 凝胶迁移实验是一种研究DNA与蛋白质或RNA与蛋白质相互作用的常用技术。这项技术是基于DNA/蛋白质或RNA/蛋白质复合体在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）中有不同迁移率的原理。当核转录因子与一条人工合成的特异的DNA或RNA结合后，其在PAGE中的迁移率将小于未结合核蛋白转录因子的DNA，从而检测到活化的与DNA或RNA结合的蛋白转录或调节因子。 本非放射性EMSA成套试剂盒是结合高灵敏度的化学致发光技术建立起来的实验系统。与市场上的EMSA产品比较，Viagene公司的EMSA试剂盒操作更简单迅速，并可得到更好的实验效果；与同位素放射法相比Viagene公司的非放射性EMSA试剂盒解决了探针不稳定、同位素辐射等问题，并具有高灵敏度、快速获得结果、避免材料浪费等优点。目前Viagene公司提供三套非放射性EMSA试剂盒用来检测活化的NF-KB(核转录因子-KB，Cat#; SIDET001)、STAT3(信号转导和转录激活因子3，Cat#; SIDET003)和STAT5(信号转导和转录激活因子5，Cat#; SIDET004)。每种试剂盒均经过多次实验测试，并已优化了DNA-蛋白转录因子的结合条件。 EMSA成套试剂配备足够的材料进行36次活化蛋白转录因子与特定DNA结合的测定；若每片凝胶做9个样品加上一个蛋白标准或指示，可以做四张膜。若每片凝胶做12个样品加上一个蛋白标准或指示，则可以做三张膜。实际应用中，因各个实验室使用的显示仪器与手段不同、感光胶片灵敏度以及胶片冲洗方法不一样，仅做一次曝光可能无法获得满意结果。当得到的图像太深或太浅时，则需要调整底物用量与曝光时间。由于用户很可能需要对同一张膜试用几次底物液，因而很难为EMSA试剂盒配备标准量的发光底物液。所以本试剂盒提供的Lighten? HRP-B底物发光系统（产品号；CHEM004）,可以做四片结合膜的EMSA实验，不够用时用户因此需要按所需用量另外购买与EMSA试剂盒配套的化学发光底物（产品号；CHEM001，CHEM002,CHEM003）。 EMSA成套试剂盒主要用于科学研究，不推荐用于疾病诊断。 2．试剂盒清单 （1）EMSA试剂盒基本组分： 10X Binding Buffer（10X 结合反应液）(-20 oC) 1 Vial（支） Poly (dI:dC) (dI:dC)（聚核苷酸竞争物）(-20 oC) 1 Vial（支） 10X Loading Buffer（10X 上样缓冲液）(4 oC) 1 Vial（支） Cold oligonucleotides（非标记竞争性寡核苷酸）(-20 oC) 1 Vial（支） Biotin-Labeled Probe（生物素标记探针）(-20 oC) 1 Vial（支） Streptavidin-HRP（链霉亲核素-HRP）(4oC) 1 Vial（支） 2×Blocking Buffer（2× 封闭液）(4 oC) 1 Bottle（瓶） 5×Washing Buffer（5× 洗涤液）(4 oC) 1 Bottle（瓶） Equilibration Solution（平衡液）(4 oC) 1 Bottle（瓶） Binding-membrane（结合反应膜）(RT) 4 pieces（片） User Manual（说明操作