食品微生物检测方法讲述.doc

 PAGE 12/ NUMPAGES 13 食品微生物检测方法 QC-O-032 QC-O-032 食品微生物检测方法  PAGE 13/ NUMPAGES 13 类别：操作标准—检验规程起草人： 日期： 年 月 日颁发部门：质量技术部审核人： 日期： 年 月 日编码：QC-O-032批准人： 日期： 年 月 日标题：食品微生物检测方法 分发部门：总经理室、质量技术部，行政部（存档）生效日期： 年 月 日总页数： NUMPAGES 13页分发号：变更记载： 修订号 原批准日期 原生效日期 变更摘要： 食品微生物检测方法 范围 本标准规定了食品微生物检测方法 1 菌落总数 1.1 培养基和试剂 ⑴、营养琼脂培养基：按GB/T4789.28-2003中4.7规定 成分: 蛋白胨 10克、牛肉膏3克、氯化钠5克、琼脂15～20克 、蒸馏水 1000ml 制法： 将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水中，加入15%氢氧化钠溶液2ml校正PH至7.2-7.4.加入琼脂,加热煮沸,使用权琼脂溶化.分装烧讧,121℃高压灭菌15分钟. 注:此培养基可供一般细菌培养之用,注平板或制成斜面.如用于菌落计数,琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面,则应为2%. ⑵ 磷酸盐缓冲液:按GB/T4789.28-2003中3.22规定. 成分： 磷酸二氢钾 34克、1mol/l氢氧化钠溶液175ml、蒸馏水825ml 、PH7.2 制法: 先将磷酸盐溶解于500ml蒸馏水中,用1mol/l氢氧化钠溶液校正PH后,再用蒸馏水稀释至1000 ml. 稀释液: 取储存液1.25 ml ,用蒸馏水稀释至1000 ml,或每管10ml,121℃高压灭菌15分钟. ⑶ 明胶磷酸盐缓冲液 成分:明胶 2克、磷酸氢二钠 4克、蒸馏水 1000ml、PH6.2 制法:加热溶解,校正PH,121℃高压灭菌15分钟. ⑷ 0.85%灭菌生理盐水 ⑸ 75%乙醇 1.2 设备和材料 ⑴ 冰箱：0~4℃ ⑵ 恒温培养箱36℃±1℃ ⑶ 恒温水浴锅46±1℃ ⑷ 均质器或灭菌乳钵 ⑸ 架盘药物天平：0~500克，精确至0.5克. ⑹ 菌落计数器. ⑺ 大镜4× ⑻ 灭菌吸管:1ml(具0.01ml刻度)、10ml(具0.1ml刻度) ⑼ 灭菌锥形瓶:500ml ⑽ 灭菌玻璃珠:直径约5mm ⑾ 灭菌培养皿直径约90mm ⑿ 灭菌试管16mm×160mm ⒀ 灭菌刀、剪子、镊子等。 1.3 检验程序（ 菌落总数的检验程序见图1） 1.4 操作步骤 ⑴ 检样稀释及培养 a. 以无菌操作将检样25克(ml)剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中以8000r/min～10000r/min的速度处理1min,做成1：10的均匀稀释液。 b. 用1ml的灭菌吸管吸取1：10的稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均匀，做成1：100的稀释液。 c. 另取1ml灭菌吸管，按上条操作方法，做10倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml吸管。 d. 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌培养皿内，每个稀释度做两个培养皿。 e. 吸稀释液移入培养皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基（可放置46±1℃水浴锅保温）注入培养皿约15ml 并转动培养皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液灭菌培养皿内作空白对照。 f. 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48h±2h. ⑵ 菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 ⑶ 菌落计数的报告 a. 平板菌落数的选择 选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长