17-硕士研究课-现代分子生物学-实时荧光定量PCR技术的原理及应用-胡忠.ppt

实时荧光定量PCR技术的原理及应用 (Real time Quantitative PCR);;;实时荧光定量PCR 原理 实时原理 ;实时荧光定量PCR原理 定量原理;实时荧光定量PCR 原理 ----------- 扩增曲线;实时荧光定量PCR 原理 -------荧光阈值;实时荧光定量PCR 原理 -------Ct值;实时荧光定量PCR 原理 -------Ct值的重现性;实时荧光定量PCR 原理 --------- 定量原理;实时荧光定量PCR 原理 --------- 定量原理;实时荧光定量PCR 原理 --------- 标准曲线;确定未知样品的 C(t)值 通过标准曲线由未知样品的C(t)值推算出其初始量;;非特异性荧光标记： 1、 SYBR Green 特异性荧光标记： 2、TaqMan 3、Molecular Beacon 4、Amplisensor;;SYBR Green 法 工作机理;实时荧光定量PCR原理 SYBR Green I 工作原理;实时荧光定量PCR原理 SYBR Green I 熔解曲线分析;实时荧光定量PCR原理 SYBR Green I 熔解曲线分析;SYBR Green 法 融解曲线分析;Cycle number;;天为时代公司利用SYBR Green 法定量检测样品DNA;SYBR Green 法 应用范围;SYBR Green 法 优缺点 ;与目标序列互补;TaqMan法 工作原理;TaqMan 法 PCR反应的建立;已肝病人血液中HBV的绝对定量 目的：利用核酸检测，缩短检验时间，提高灵敏度，为诊断用药提供依据 方法：从血液中提取病毒DNA，扩增病毒基因，以TaqMan探针进行检测 设置对照：浓度为106、105 、104 103 的标准样品各一个，设阴性和空白对照 实验步骤：提取HBV DNA 设计特异引物 设计TaqMan探针并标记探针 扩增程序 结果：获取血液样品中HBV DNA的精确copy数;数据分析;TaqMan法 应用范围;TaqMan法 优缺点;实时荧光定量PCR 方法 3------- Molecular beacon 法(分子信标);Molecular beacon (分子信标) 工作原理;Molecular beacon (分子信标) 应用范围 ;Molecular beacon (分子信标) 优缺点;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;