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; ; 硅胶基质- pH 3~8 Al2O3 . nH2O - pH1~14 聚合物基质 - pH1~14;硅胶纯度 ? 填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度 色谱柱尺寸 ? 填料床的长度和内径 颗粒形状 ? 球型或不规则型 粒径 ? 平均颗粒直径, 通常3-10μm 表面积 ? 颗粒外表面和内部孔表面的总和, 以m2/gram表示 孔径 ? 颗粒的孔或腔的平均尺寸, 范围80-300? ;键合类型 ? 单体键合 - 键合相分子与基体单点相连 ? 聚合体键合 - 键合相分子与基体多点相连 碳覆盖率 ? 键合相的键合量常用含碳量(C%)来表示，也可以用覆盖度来表示。所谓覆盖度是指参与反应的硅醇基数目占硅胶表面硅醇基总数的比例。 封端 ? 键合步骤之后, 用短链将裸露的硅羟基键合后封闭起来;A类硅胶 Original ZORBAX SIL (1970s) 由于带负电荷的残留硅羟基和酸性表面上金属含量高 (硅羟基的pKa低), 导致碱性化合物发生拖尾 ;色谱柱尺寸 --- 对色谱分离的影响 ? 短柱 (15-100mm) - 运行时间短, 柱压低 ? 长柱 (150-250mm) - 分辨率高, 运行时间长 ? 窄径柱 (? 2.1mm) - 检测器灵敏度高 ? 宽径柱 (3-21.2mm) - 载样量高;颗粒形状 --- 对色谱分离的影响 当使用黏度较大的流动相50:50=MeOH:H2O时, 球型颗粒可以降低柱压, 延长色谱柱寿命;表面积 --- 对色谱分离的影响 高表面积对于多组份样品的分离具有较强的保留能力, 柱容量和分离度. 表面积低的填料通常能迅速达到平衡状态, 对于梯度淋洗尤为重要;键合类型 --- 对色谱分离的影响 单齿键合： 提高传质速率, 加快色谱柱平衡 双齿键合： 增加色谱柱稳定性, 增加色谱柱的载样量 ;碳覆盖率--- 对色谱分离的影响 高碳覆盖率：提高分辨率, 分析时间长 低碳覆盖率：缩短运行时间; 固定相键合 二甲基硅烷 ;键合相种类;HPLC---色谱柱与pH的关系;HPLC---保留值与pH的关系;;HPLC---保留值与pH的关系;保留时间;;样品溶剂溶解强度;中性分析时为何要使用缓冲液？;;三乙胺对碱性成分峰形的影响;竞争酸对酸性组分的峰形的影响;液相分析-小诀窍;样品: 除草剂 流动相: 52/48 0.1 M乙酸钠/甲醇, pH 6 流速: 0.45 mL/min 温度: 40℃, 90℃ 检测: UV ;液相色谱柱: Zorbax StableBond-C8 色谱柱尺寸: 150 mm, 5μm;色谱柱 使用小体积色谱柱对于检测器响应时间的重要性 (TE32);色谱柱 不同硅胶类型比较 (TE1);pH对苯胺取代物分析的影响;;有机改性剂和pH对于选择性的影响;色谱柱的选择性;流动相对色谱的影响;反相HPLC常用缓冲液;鬼峰产生原因及解决方法;鬼峰产生原因及解决方法