PCR仪和凝胶成像系统.ppt

PCR仪和凝胶成像系统;内 容; 多聚酶链式反应 （PCR：Polymerase Chain Reaction);体内DNA的复制体系;Mullis的PCR构思;thermus aquaticus;Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus);Taq;PCR反应条件; PCR反应条件 变性 使双链DNA解链为单链 94℃， 20-30秒 (2) 退火 温度由引物长度和GC含量决定。 增加温度能减少引物与模板的非特异性结合; 降低温度可增加反应的灵敏性。 一般为45～65℃, 30秒;（3）延伸 70-75℃,一般为72℃ 延伸时间由扩增片段长度决定，1分钟扩增1Kbp （4）循环次数 主要取决于模版DNA的浓度 一般为25-35次 次数过多：扩增效率降低 错误掺入率增加;PCR的基本原理;PCR的基本原理小结; 实时荧光定量PCR仪;PCR示例;1.按照如下体积向PCR管中按顺序加入各试剂 并混匀： 10 X PCR反应缓冲液 2.5 μL 25mmol/L MgCl2 2.0μL