Genomics第2章.ppt

第2章 研究DNA; 生物化学研究为分子生物学家提供了可以在试管中操作DNA分子的酶。 分子生物学家利用酶按预定的方式操作DNA分子，如复制、切割和重排等。这些操作形成了DNA重组技术的基础。;; DNA重组方法学导致了DNA克隆的产生（20世纪70年代）。 到20世纪80年代中期主要技术突破是聚合酶链反应的发明。;DNA克隆 要克隆的DNA片段被插入到质粒载体中，随后质粒载体就在细菌宿主内复制。;; 2.1 用于DNA操作的酶 2.2 DNA克隆 2.3 聚合酶链反应（PCR） ; 酶分为四大类 ① DNA聚合酶（DNA polymerase）：是一类以现存DNA或RNA为模板合成新的互补多聚核苷酸的酶。 ② 核酸酶（nuclease）：通过切断连接两个核苷酸之间的磷酸二酯键降解DNA分子。 ;DNA依赖的DNA聚合酶活性如左边所示，RNA依赖的DNA聚合酶如右边所示。;内切核酸酶和外切核酸酶的活性;③ 连接酶（ligase）：在两个不同分子的末端??苷酸或单个分子的两末端核苷酸之间形成磷酸二酯键而将DNA分子连接在一起。 ④ 末端修饰酶（end-modification enzyme）：改变DNA分子末端，为连接实验的设计增加重要的可操作空间，并提供了一种用放射性及其他标记物标记DNA。 ;;2.1.1 DNA聚合酶 1. 依赖模板的DNA聚合酶的工作模式