HPLC色谱常见问题和对策.docVIP

HPLC色谱常见问题1. 用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？2. 液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？3. HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法4. 做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？5. 我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不重现，为什么？6. 我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？7. 色谱双峰产生的可能及判断和处理8.色谱柱中的流动相会排干吗？9.使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接头需要注意什么问题？10.液相色谱梯度洗脱中柱温的影响有那些？11.为何基线会漂移12.规则的基线噪音是如何产生的13.不规则的基线噪音是如何产生的14.保留时间漂移的故障排除15.为何出现肩峰或分叉？16.为何出现鬼峰？17.为何出现峰拖尾？18.为何出现峰展宽？19.除了流速外，还有哪些因素能引起压力改变？20.什么是强溶剂、弱溶剂？21.怎样才会使峰位发生重排？22.除了在线脱气常用的实验室脱气方式还有哪些？23.评价一个色谱柱的最基本指标有那些？24.什么是时间常数？25.为什么在实验过程中有时会出现倒峰？26.为何会出现“胖”峰和平头峰？怎样避免？27.什么是次级保留效应？28.前延峰的发生及处理？29.峰变宽的原因？30.柱平衡慢的常见原因有哪些？31.用内标法实验时对内标物的要求有哪些？32.管子切割与安装注意事项？33.什么是HPLC的“无限直径效应”？34.如何评价一台检测器？35.如何简单判断比例阀是否内漏？1. 用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？ 关于漂移问题： ① 温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定 ② 流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 ③ 柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡  关于快速变化问题  ① 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定 ② 泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。  ③ 流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合 2.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？ ① 筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。 ② 存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子 ③ 可能柱超载，减少进样量。 3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法 ① 样品量不足，解决办法为增加样品量  ② 样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子 ③ 样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器 ④ 检测器衰减太多。调整衰减即可。  ⑤ 检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数 ⑥ 检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。  ⑦ 检测池中有气泡。解决办法为排气。 ⑧ 记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。 ⑨ 流动相流量不合适。调整流速即可。  ⑩ 检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。 4.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？ ① 泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理； ② 比例阀失效，更换比例阀即可；  ③ 泵密封垫损坏，更换密封垫即可；  ④ 溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法； ⑤ 系统检漏，找出漏点，密封即可； ⑥ 梯度洗脱，这时压力波动是正常的。 5.我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？ 这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。尽管过去几年来，填料的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。因此，同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物，如三乙基胺（TEA），将会使硅醇基的成键能力饱和，从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。 如分离情况可以，系统稳定，达到系统适用性要求，就不必保留时间的重现。 6.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？ 柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。 ① 拆去保护预柱，看柱压是