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影响紫杉醇生产的因素和提高产量的方法 姓名：赵玉 学号：090913058 摘要：概述了利用植物细胞大量培养,发根农杆菌转化的发根培养,产紫杉醇真菌养及基因工程等生物 技术生产抗癌新药紫杉醇的研究现状,并对各种途径的应用前景进行展望。 关键词：紫杉醇　细胞培养　发根培养　产紫杉醇真菌 1　1，概述 紫杉醇(taxol)是从红豆杉科(Taxaceae)红豆杉属(Taxusspp.)植物树皮、针叶中分离,出的一种四环二萜酰胺类化合物, 它能有效地治疗晚期卵巢癌,乳腺癌和其它癌症,被称为是过去几十年中发现的最好的抗癌药物。1992年12月29日, 美国FDA正式批准紫杉醇作为治疗晚期卵巢癌的新抗癌药物(商品名为Pacli-taxel)。由于紫杉醇在植物体中的含量 相当低,大约从3～6棵60～100年生大树的树皮中才能提取到1g紫杉醇,可治疗一个癌症患者。目前全球每年200kg 紫杉醇的消耗量意味着要砍伐100万棵红豆杉大树,随着紫杉醇应用范围的扩大,其需求量必然会逐年增加,而红豆杉 树生长速度相当慢,直径20cm的树需生长100年!因此,伐树生产紫杉醇的方法不仅会严重破坏该树的长期生存和分布, 也根本无法满足人们对紫杉醇的需求。尖锐的供需矛盾在医学、化学和生物学领域中引起了一场非同寻常的广泛研 究,以增加这种化合物的来源。本文概述国内外利用生物技术生产紫杉醇的研究进展。 2　利用细胞大量培养技术生产紫杉醇 利用红豆杉细胞大量培养技术生产紫杉醇及其合成前体是扩大紫杉醇来源的重要途径之一。它具有不破坏自然资源 和生态环境,不受自然条件限制等优点。目前国内外几十家实验室已对红豆杉属的10个种或变种进行过细胞培养研究, 自克里森(Christen A.A.)于1991年5月在美国申请了用细胞培养技术生产紫杉醇的专利以来,国内外至少已批准了9个 利用细胞培养技术生产紫杉醇及其类似物的专利。也有许多公开的研究报目前红豆杉愈伤组织诱导与培养技术已经 成熟,诱导愈伤组织的基本培养基,激素种类和浓度,外植体类型,培养条件等因素和培养程序都已经确定。最初严重限 制愈伤组织生长的褐化现象也已经被成功地克服。在许多实验室里愈伤组织已经继代培养5～6年以上。加拿大多伦 多大学费特-内托(Fett-NetoA.G.)等(1992)报道,培养2个月的东北红豆(T.cuspidata)愈伤组织中,紫杉醇含量可达其干 重的0.020±0.005%,而其悬浮细胞中紫杉醇含量仅为干重的0.0014±0.0003%。将悬浮细胞固定在玻璃纤维网上,可 连续培养6个月,其中的紫杉醇含量可达0.012%。随后他们又优化了愈伤组织的培养条件,发现蔗糖浓度,B5培养基的 有机物,可溶性和不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等对东北红豆杉愈伤组织生长和紫杉醇含量无显著影响。在培养基中加 入0.5mg/L的GA3使愈伤组织鲜重增加1倍,而不影响紫杉醇含量。加入0.1mmol/L的苯丙氨酸使愈伤组织中紫杉醇含量 增加1倍,而对愈伤组织鲜重没有显著影响。此外,他们还研究了东北红豆杉细胞悬浮培养中紫杉醇合成、细胞生长及营 养物质吸收的动力学,结果表明,红豆杉细胞生长缓慢,鲜重和干重加倍时间分别是17天和20天,细胞中紫杉醇的含量与细 胞的生长不呈相关性且较低(4μg/g干重)。在一个生长周期(40天)中,培养基中的紫杉醇含量有2个高峰:一个在培养初期 (0.4μg/ml),另一个在生长末期(0.1μg/ml)。按体积计算,在静止期(第3 8天)产生的紫杉醇平均总量为0.15μg/ml,其中大 约有66%存在于培养基中,34%存在于细胞内。碳水化合物的总吸收量与干物质的积累具有相关性,蔗糖在培养的前6天 内全部被水解,葡萄糖的利用先于果糖。氮在整个培养周期中都被同化,而磷只在培养的前一周被吸收。因此,可以通过控 制培养基的营养,特别是碳水化合物来促进红豆杉悬浮培养细胞生物量的增加,通过减少氮素使用以延长静止期,提高紫杉 醇产量。在红豆杉高产细胞系筛选方面也取得了很大进展,一些筛选出的高产系紫杉醇含量达到了0.1%,比天然树皮中的 紫杉醇含量高出10～100倍。李家儒等(1996)首次报道了红豆杉单细胞克隆的建立过程,用悬浮培养10～15天的细胞培养 物分离单细胞,采用看护培养技术成功地建立起单细胞克隆,这为筛选纯合稳定的红豆杉高产细胞系奠定了技术基础。目前 利用细胞大量培养技术生产紫杉醇研究已经进入到生物反应器放大阶段,我国也把红豆杉细胞大量培养研究列入国家“九五” 研究计划。美国某公司已经完成4 000L的培养技术,正在进行20 000L规模的工业放大研究。另外,华盛顿大学的汉(Han K.H.) 等(1994)报道,用根癌农杆菌(A.tumofaciens)B0542和C58感染成年太平洋红豆杉