细菌DNA试剂盒说明书.docVIP

杭州新景生物试剂开发有限公司区 地址：浙江省杭州市西湖科技经济园金蓬街366号1幢东4F 邮编：310030 电话：0571传真：0571 HYPERLINK  仅供科研使用，请勿用于人体及动物的治疗或临床诊断。 Ver.2 细菌DNA试剂盒说明书 产品组成 细菌DNA试剂盒 Cat. No.5次样品 330200550次制备 3302050核酸纯化柱 2 ml离心管 溶菌酶 Buffer L1 Buffer L2 Buffer WA（浓缩液） Buffer WB（浓缩液） Buffer TE 说明书5个 5个 60 mg 2 ml 2 ml 1.9 ml 1.5 ml 2.5 ml 1份 50个 50个 600 mg 14 ml 14 ml 12 ml 9.5 ml 25 ml 1份  产品储存与有效期 溶菌酶请置于2~8℃贮存。 其他物品如果储存于室温（15~25℃），可在两年内保持使用性能无明显变化；如果将产品贮存于2~8℃，可延长产品的有效期至两年以上。 技术支持 杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：e-mail:  HYPERLINK mailto:technical@ technical@, 电话：400-0099-857。 产品介绍 本产品适合从1-5 ml 细菌培养物中分离纯化总DNA。细菌经溶菌酶破壁处理后，被Buffer L1溶解，再经Buffer L2沉淀去除蛋白和细胞碎片，离心上清中的基因组DNA可结合到纯化柱上。经过Buffer WA和Buffer WB的洗涤，去除残留在膜上的蛋白与PCR抑制物后，基因组DNA用Buffer TE洗脱，并可立即用于各种分子生物学实验。 用户需自备的试剂与物品 去离子纯水和无水乙醇。 移液器及吸头（为避免样品间的污染，推荐选用含有滤芯的移液器吸头） 一次性手套及防护用品和纸巾 台式小量离心机（可配离心1.5ml离心管和2ml离心管的转子） 水浴锅和旋涡震荡器 使用前准备 1）如果离心机有制冷功能，请将温度设置到25℃。 2）将水浴锅温度设置到37℃，并将Buffer TE温育至37℃。 3）根据一次提取的细菌标本数（按每个标本需加100 μl溶菌酶溶液计算）配制适量的100mg/ml的溶菌酶溶液：比如要提取6个标本的细菌基因组DNA，则称取65mg 溶菌酶干粉，加入650 μl 去离子纯水配制成650 μl 溶菌酶溶液。 注意：反复冻融溶菌酶???液对其活性影响极大，如果一次配制了较多的溶菌酶溶液，应分装成小份于-20℃储存，解冻使用后的溶菌酶溶液如有剩余，应予以丢弃，不可再次冻存。 根据试剂瓶标签上的指示在Buffer WA和Buffer WB中加入无水乙醇，并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标记。 操作步骤： 1. 用1.5 ml离心管收集1-5 ml细菌培养物，加入200 μl Buffer TE，旋涡震荡充分悬浮细菌。 * 某些二价阳离子会抑制溶菌酶的活性，如果细菌培养基中含有二价阳离子（如MRS培养基等），应在离心收集细菌后增加一次洗涤步骤：加入1ml蒸馏水，旋涡震荡悬浮细菌后12000 rpm离心30秒，弃蒸馏水上清，再加入200 μl Buffer TE，旋涡震荡充分悬浮细菌。 * 细菌收集方法： a) 悬浮培养的细菌：12000rpm离心30秒收集1~5 ml 细菌培养物中的细菌，弃培养基。 b) 培养皿中的单菌落：在1.5ml离心管中加入200 μl Buffer TE, 用接种环刮取菌落，将细菌洗脱在Buffer TE中。 2. 加入100 μl溶菌酶溶液，旋涡振荡约15秒混匀，37°C水浴30-60分钟。 * 大部分细菌水浴30分钟后已经充分破壁，但是某些细胞壁较厚的细菌（比如金黄色葡萄球菌）需要处理1-2小时才能完全破壁。请根据不同类别的细菌适当调整水浴时间。 3. 加入225 μl Buffer L1，旋涡振荡30秒。 * 如果从新鲜培养的细菌中提取DNA，可能会将细菌中的部分RNA一起分离纯化出来，但是RNA的存在并不影响PCR相关的实验。如果要彻底除去RNA，可在本步骤中补加4 μl RNase A 储存液（100 mg/ml，本试剂盒不提供）。 4. 加入225 μl Buffer L2，剧烈摇晃离心管3~5次，再旋涡振荡30秒混匀。 5. 13000 rpm 离心2分钟。 6. 将步骤5中的上清液倒入到核酸纯化柱中（核酸纯化柱置于2ml 离心管中），盖上管