广西大学 高级生物化学课件— 重组DNA技术-2.pptVIP

重组DNA技术;第一节 概述 ;一、克隆体系：目的基因、载体DNA、工具酶、宿主细胞等 ;质粒（plasmid）：存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子，在细胞中可以独立进行复制并在细胞分裂时恒定地传给子代细胞。;配伍末端（compatible end）：不同限制性内切酶产生的相同粘性末端 ;第二节 DNA克隆的基本过程;cDNA文库(cDNA library)：以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌，这些受体菌包含了所有cDNA信息，总称cDNA文库 。常用于筛选编码蛋白质的结构基因。; 2、常用载体：质粒、噬菌体、病毒DNA ; 2、转染（transfection）：将外源DNA导入真核细胞的过程 ;六、“表达”：使克隆基因在宿主细胞中复制、表达 ;突变方法;插入突变;Distribution of Tn5gusA5 in the genome（partial）;Confirmation of TAIL-PCR determined transposon position by PCR; Strategy of pK18mob integration mutagenesis; Physical map of pK18mob;Nonpolar gene inactivation by