丹参酮ⅡA对动脉粥样硬化的影响和其可能分子机制研究.pdf

研究方法一．丹参酮Ⅱ?远?鲋嘌?不?挠跋?用巨噬泡沫细胞模型??芯科淇赡艿姆肿踊?撇⒔?徊矫魅返げ瓮狪????锏姆肿楹痛??采用经典的??乒小鼠模型，将其随机分为七组，分别为正常组?／??，模型?げ瓮狪?模型???谽???????作溶剂，所有组别皆给予正常饲料。动态检测血脂水平并动态观察动脉粥样硬化斑块形成程度，直至?周。??げ瓮駻对动脉粥样硬化形成的影响①丹参酮??远?鲋嘌?不?呖槊婊?挠跋?做成病理切片后用荧光显微镜????????鄄炫恼眨?擞肐???进行②丹参酮Ⅱ?匝G逯醒V??胶透卧嘀醒V??降挠跋?血清中总胆固醇??和甘油三酯??的检测使用常规的酶法试剂盒?本┲猩?笨?。肝脏中?和?的检测采用???痬?谡袅笏?性冉???采用氯仿甲醇?／?瑅／?萃取，提取的脂质用液氮吹干后用异丙醇重新溶解，通过试剂盒检测起血脂的浓度。③丹参酮??匝G逯衞??的影响采用????觳庋G逯械膐??的含量。严格按照试剂盒所附说明书进行操作。在包被好抗兔???固宓??装逯屑尤???谋曜迹?袅笏???样本，然后加入生物素结合的反应液??，将其置于??孵育???７跤?崾?后，将反应液倒出，然后用在洗板机上用专用的洗涤液洗?危??唇岷系拇涌?内洗去，然后将??的酶结合反应液加入孔内将其置于?℃孵育????僖?次在洗板机上用洗涤液洗?危?缓蠓直鸺尤???南陨?罙和显色剂?糜??远?鲋嘌?不?挠跋旒捌淇赡芊肿踊?蒲芯??笰?可能的作用靶点。???／???Ｐ妥???乒??Ｐ?丹参酮??呒亮孔???士????屑亮孔???√???低剂量组????????／??，模型?练ニ?????????／??。?／??，药物用羧甲基纤维素钠????将小鼠的主动脉分离取出，然后取其主动脉弓，纵向剖开作油红?旧ǎ?分析。中山大学硕士论文丹参酮?? 峋?琓?图亮孔??????．???。?げ瓮狪?分别与巨噬细胞预孵育???肕兀二．丹参酮Ⅱ?跃奘上赴?闳〉ü檀嫉挠跋??℃孵育????詈蠹尤胫罩挂褐罩狗从Γ?糜诿副暌巧显?????觳馕??度值??。同时依据一个剂量依赖的标准曲线可以最终得出样品血清中???④丹参酮??匝G逯蠸?和??挠跋?分别采用常规的试剂盒检测血清中??钚院蚆?含量。各组血清的??活性和???考觳獾木咛宸椒ㄑ细癜凑帐约梁兴?剿得魇榻?小Ｔ诩觳庵??⑤丹参酮Ⅱ?缘ü檀忌闳∠喙鼗????，???泶锏挠跋?提取小鼠胸腹主动脉中的??采用半定量???的方法检测胆固醇摄取⑥丹参酮??訮??表达的影响提取小鼠胸腹主动脉中的??采用半定量的???的方法检测???表达的情况。??奘上赴?呐嘌?刖奘膳菽?赴?Ｐ偷慕??采用???．?赴?曜魑Q芯慷韵螅??渑嘌?诤??サ腇?的????培养液中，在?。??％??嘌?裂侨诤献刺?笫笛椋?笛椴捎么ù?后??代的细胞。用密度梯度离心法分离血浆中???弥张ǘ却??对其进行氧化饰???票赋蒾??，用??痬?膐??培养巨噬细胞??げ瓮狪??跃奘上赴?ü檀忌闳〉挠跋?①细胞的分组和处理采用???．?Q芯慷韵螅??浞治?组，分别为正常对照组，模型组法来评价丹参酮??跃奘上赴?亩拘浴??げ瓮狪??直鹩刖奘上赴?し跤???儆???痬?膐??作用??，酶法检测细胞总胆固醇含量。?远?鲋嘌?不?挠跋旒捌淇赡芊肿踊?蒲芯?的浓度。摸索一个最佳的反应体积，经摸索血清??淖罴焉涎?课??。相关基因表达的情况。???怪?纬删奘膳菽?赴??⒕?秃欤畂染色鉴定巨噬泡沫细胞的形成。????琓?呒亮孔??????????琓?屑亮孔??????将???????中山大学硕士论文丹参酮?Ⅳ 研究结果一．丹参酮Ⅱ?远?鲋嘌?不?挠跋??げ瓮狪?分别与巨噬细胞预孵育．?，用液体闪烁计数法检测细胞胆固醇流入情况。胆固醇流入用细胞的???宰蹸???养液??细胞??，再乘以??ダ幢硎尽???げ瓮狪?对巨噬细胞胆固醇摄取相关基因以及对????泶锏挠跋臁?将??以及???的表达。采用免疫荧光的方法检测巨噬泡沫细胞表面??的表达。???牍?常对照组相比，??蟾髯锳??小鼠在体重和一般特征上没有显??胝?６哉兆橄啾龋??后模型组??乒小鼠斑块面积有明显的显著性显的改善作用，且随着剂量的增加具有明显的剂量依赖性，同时使用的两个阳性对照药亦具有很好的改善斑块形成的作用。??胝?６哉兆橄啾龋??后模型组????／?⑹笮馗怪鞫?鲅V??矫飨???τ米锳?????鼠胸腹主动脉血脂具有明显的下降，且具有剂量依赖性。同时使用的两个阳性对照药亦具有很好的降低胸腹主动脉血脂的作用，且丹参酮?呒亮孔榈淖饔糜肫渥饔没?鞠嗨啤???胝?６哉兆橄啾龋??后模型组????⑹笱G逯蠺?蚑??矫?显升高，但应用丹参酮??匝G逯醒V?挥杏跋欤琕?橐嗝挥杏跋欤?练ニ?丁组却能很好的显示其降血脂的作用??胝?６哉兆橄啾龋??后模型组????